Je účinná - analýza moči na tuberkulózu?

Analýza moči je jedním ze způsobů detekce mycobacterium tuberculosis v lidském těle. Používá se spolu s tuberkulinovými testy, hardwarovými diagnostickými metodami, testy krve a sputa.

Studie se používá k identifikaci extrapulmonálních forem onemocnění: tuberkulózy ledvin, močových cest, reprodukčního systému.

Jak se provádí analýza moči za účelem identifikace patogenů, jaká pravidla musí být dodržena, aby bylo dosaženo přesného výsledku?

Analýza moči mikrobakterií tuberkulózy: indikace pro. T

Tuberkulóza ledvin a urogenitálního systému je méně častá než plicní forma onemocnění, ale vzhledem k absenci výrazných symptomů a komplikované diagnózy často způsobuje vážné následky.

Foto 1. Obrázek ledvin modifikovaný infekcí tuberkulózy.

Hlavní indikací pro analýzu moči je podezření na extrapulmonální tuberkulózu. Tato studie je určena lidem, kteří byli dlouhodobě neúspěšně léčeni pro patologické stavy, jako je cystitida, zánět prostaty a přívěsky, ledviny, urolitiáza. Nedostatek výsledků léčby urogenitálních onemocnění může naznačovat, že jsou způsobeny Mycobacterium tuberculosis.

S potvrzenou diagnózou se tato studie provádí za účelem stanovení typu mykobakterií a výběru správného léčebného režimu a v pokročilých případech k posouzení stavu močového systému.

Nápověda V plicní formě nemoci je obecná analýza moči prakticky neinformativní, protože patologický proces nezpůsobuje jasné změny v jeho složení.

Jak to udělat?

S porážkou těla tuberkulózou se mykobakterie vylučují všemi tělními tekutinami, včetně moči. Nejpřesnější metody diagnostiky onemocnění jsou bakterioskopie nebo naočkování vzorku biomateriálu na živná média. Ranní močová část se používá k identifikaci mikroorganismů a studie se doporučuje opakovat 2-3 krát, protože není vždy možné určit infekci první částí moči.

Je to důležité! Extrapulmonální formy tuberkulózy jsou často asymptomatické (někdy pacienti pociťují v bederní oblasti trochu nepohodlí), takže analýza moči hraje důležitou roli při včasné diagnóze a léčbě onemocnění.

Příprava na analýzu

Pro dosažení spolehlivého výsledku se pacientovi doporučuje dodržovat několik pravidel:

• pro den nepoužívat produkty, které mohou změnit barvu kapaliny (řepa, borůvky, mrkev, atd.);
• odmítnout užívat některé léky: diuretika, vitamíny skupiny B, aspirin;
• ženy jsou lépe sbírat materiál před nebo po menstruační krvácení.

Před odběrem moči se doporučuje důkladně opláchnout genitálie a poté „průměrnou“ moč zachytit ve sterilní nádobě. Aby se zabránilo kontaminaci a vniknutí bakterií do biomateriálu, musí být nádoba okamžitě těsně uzavřena. Před odebráním vzorku do laboratoře by měl být vzorek uložen na chladném místě.

Pozor! Kontaminace biomateriálu může vést k inhibici růstu mykobakterií a k falešně negativnímu výsledku.

Podstata a metodika

Mycobacterium tuberculosis patří k nižším houbám a jsou delší než jedna setina milimetru. Při analýze moči mohou být identifikovány třemi způsoby: bakteriologicky, bakteriologicky, s použitím biologického vzorku.

Bakterioskopické (podle Zill-Nielsen). Podstatou metody je, že mykobakterie nejsou schopny žít v kyselém prostředí, takže k jejich identifikaci se používají speciální reagencie, které barví všechny nestabilní struktury. Nejprve se odbarví kyselinou sírovou, načež se vstřikuje roztok methylenové modři. Díky tomu získávají všechny struktury a buňky jasně modrou barvu, s výjimkou mykobakterií, která se stává karmínově červenou.

Nevýhoda této metody spočívá v tom, že je obtížné čistit moč nečistot, což snižuje přesnost studie (pro zvýšení diagnostické hodnoty studie se moč odebírá pomocí katétru).

Bakteriologické. Další způsob, jak identifikovat původce tuberkulózy při analýze moči, je bakteriologický. K provedení sedimentu se odebírá moč, po kterém se kultivuje v živném médiu.

Mínus metody je poměrně dlouhý a čeká na výsledek. Přesné termíny se liší v závislosti na typu média, které se používá pro kultivaci biomateriálu. Při použití krevního prostředí bude výsledek muset počkat asi 7 dní, brambor - 30-45 dnů.

Foto 2. Výsledek bakteriologického testu: bakterie, které byly v močovém sedimentu pacienta, byly pěstovány v Petriho misce.

Biologický vzorek. Nejcitlivější metoda detekce mykobakterií, která se často používá namísto Mantouxovy reakce.

Vzorek moči je injikován do morčete a zvíře může být použito pro přesnou diagnózu během několika měsíců. Chcete-li udělat diagnózu dříve, můžete si vzít tuberkulinový test z příušnic.

Přesnost bakterioskopické a bakteriologické analýzy je asi 80%, přesnost biologického vzorku je 100%.

Pro detekci tuberkulózy urogenitálního systému se používá nejen bakteriologické, ale i obecné vyšetření moči. Indikátory onemocnění jsou nejen mykobakterie, ale také charakteristické leukocyty podobné nehtu, protein (proteinurie), nespecifické bakterie, zvýšení koncentrace červených krvinek. Kyselinová reakce vzorku biomateriálu je pozorována v asi 60% případů, takže jej nelze považovat za přesné diagnostické kritérium.

Nápověda Nejvíce informativní ukazatel tuberkulózy, podle většiny odborníků, je klasická triáda: pyurie (přítomnost hnisu ve vzorku), albuminurie (nebo stopy bílkovin) a kyselá reakce.

Co je to PCR pro tuberkulózu a jak provést test?

PCR pro tuberkulózu je předepsána, když není možné provést diagnózu nebo není možné provést další studie. Analýza umožňuje identifikovat Kochovu hůlku v nejranějších stadiích a zahájit léčbu včas.

Popis PCR pro tuberkulózu

Indikace pro PCR diagnostiku

Typy PCR pro tuberkulózu

Příprava na analýzu

Jak je PCR pro tuberkulózu

Interpretace výsledků průzkumu

Zvláštnosti PCR pro tuberkulózu u dětí

Kolik stojí PCR za tuberkulózu?

Komentáře a recenze

Popis PCR pro tuberkulózu

PCR (polymerázová řetězová reakce) pro tuberkulózu je přesná analýza, která dokáže detekovat Kochovu hůlku během několika hodin. Diagnostika je založena na metodách genetického inženýrství. Lékaři izolují DNA buňku pomocí genově-molekulárních testů pro určení typu patogenů.

Výhody metody

• umožňuje identifikovat patogen v raných stadiích, bez projevu viditelných symptomů;
• diagnostika nemá žádné kontraindikace a je povolena pro děti;
• výzkum může být prováděn při odebírání minimálního množství materiálu.
• univerzálnost výzkumu biomateriálů;
• Studie je účinná při určování recidivy onemocnění.

Nevýhody metody

Kromě výhod mají studie PCR také nevýhody.

Hlavní jsou:

1. Studie není všude, kam můžete projít. Protože zařízení pro takovou diagnózu je drahé, je instalováno v placených laboratořích.
2. PCR pro tuberkulózu může poskytnout pozitivní odpověď, pokud detekuje mrtvé mykobakterie, například po léčbě.
3. Mutace patogenů významně snižují účinnost metody PCR, protože vlákna DNA nejsou schopna sekvenčně syntetizovat.
4. Potřeba pečlivě vybrat biomateriál pro analýzu.

Indikace pro PCR diagnostiku

Poslat do průzkumu následující údaje:

1. Pokud došlo k alespoň jednomu kontaktu s pacientem s tuberkulózou a je obtížné identifikovat nemoc pomocí standardních testů.
2. Jsou situace, kdy není možné přivést osobu k rentgenovému záření nebo jiným studiím. V takových případech je mnohem snadnější podat sputum.
3. Analýza je jmenována v předvečer nadcházející operace, kdy je nutné určit, zda je člověk nemocný nebo ne.
4. Pokud má pacient pochybný výsledek reakce Mantoux.
5. Přiřaďte těhotným ženám a dětem, abyste se vyhnuli vystavení rentgenovému záření.

Typy PCR pro tuberkulózu

Volba biomateriálu pro screening tuberkulózy by měla být určena individuálně.

Pro diagnostiku PCR pro tuberkulózu mohou být provedeny testy:

Krevní test

Vlastnosti krevního testu na tuberkulózu:

1. Provádí se v případech, kdy jiná diagnostika není vhodná nebo kontraindikována. Chcete-li například provést správnou diagnózu, musíte pořídit více než jeden rentgenový snímek. Nadměrná expozice není pro tělo bezpečná, takže je mnohem jednodušší odebrat krev pacientovi.
2. Také lékař může dát směr krev, když přijímá kontroverzní výsledky po fluorografii.

Analýza slin

1. Analýza slin je méně populární a informativní než jiné studie, protože tuberkulóza neovlivňuje slinné žlázy. Ve většině případů bude výsledek negativní.
2. Cílem této metody je identifikovat plicní a extrapulmonální formy.
3. Pokud se barva vzorku nemění působením činidla, znamená to, že neexistují žádné patogeny. Pokud se však objeví podezření na nemoc, provede se další komplex analýz.

Analýza sputa

Analýza sputum je nejvhodnější pro detekci patogenů tuberkulózy. Vzorky se odebírají několikrát, zpravidla třikrát. To vylučuje možnost chyb při získávání nekvalitního materiálu.

Pokud je člověk infikován tuberkulózou, sputum v malých množstvích bude uvolněno spolu s kašlem. U pacientů v pokročilém stádiu onemocnění bude hlen vyloučen krvavými skvrnami.

Nedoporučuje se užívat sputum k vyšetření, pokud má pacient podezření na tuberkulózu kostí nebo nervového systému.

Analýza moči

Analýza moči je jedním ze způsobů detekce extrapulmonálních forem onemocnění: tuberkulózy ledvin a močového systému.

V případě plicní formy onemocnění je obecná analýza moči prakticky neinformativní, protože nejsou pozorovány žádné výrazné patologické změny.

Z videa zjistíte, který lékař dělá diagnózu tuberkulózy. Natočeno kanálkovým tuberkulem. ru.

Příprava na analýzu

Při provádění krevního testu by PCR měla dodržovat některá pravidla, aby získal spolehlivý výsledek:

• Doporučuje se provést analýzu nalačno;
• vyloučit alkohol v předvečer průzkumu;
• musíte ukončit užívání antibiotik 15–20 dní před analýzou;
• Před odběrem krve se doporučuje zdržet se kouření.

Při zkoumání sputa se také doporučuje dodržovat některá pravidla:

• materiál se shromažďuje ráno, a proto si předčistí zuby a důkladně opláchne ústní dutinu;
• pokud se sputum nepohybuje dobře, doporučuje se užívat expektoranci večer nebo inhalovat;
• Je nutné přestat užívat antibiotika 15 dnů před vyšetřením.

Pro získání spolehlivého výsledku analýzy moči se pacientovi doporučuje dodržovat následující pravidla:

• materiál musí být shromažďován ráno;
• v předvečer se nedoporučuje jíst potraviny, které mohou změnit barvu tekutiny (červená řepa, borůvka a další);
• Přestat užívat antibiotika 15 dnů před vyšetřením.

Jak je PCR pro tuberkulózu

Vlastnosti příjmu materiálu:

1. Krevní test se odebere pacientovi ráno ze žíly v laboratoři.
2. Pro dodávání sputa na hlen je nutné nutně z hrtanu a výhodně bez velkého množství slin. Její pacient musí plivat do speciální sterilní nádoby a předat ji studii.
3. Lékaři si seškrábnou speciálním nástrojem z lícní sliznice.
4. Moč se pronajímá ve speciální nádobě. Vezměte střední část ranní části.

Molekulárně genetická reakce pomocí PCR se provádí pomocí speciálního zařízení zvaného amplifikátor. Studovat nezbytné DNA segmenty, které začínají syntézu molekul.

Technika se skládá ze čtyř fází:

1. Zpočátku je požadovaný biomateriál shromažďován pro výzkum (krev, sputum a sliny).
2. Pak se vzorek zahřeje na teplotu až 98 ° C a ne déle než dvě minuty. Primární forma genetiky DNA je tedy zničena a tvoří se dva řetězce.
3. Dále přichází žíhání nebo snižování teploty, v důsledku čehož se primer váže na řetězec DNA.
4. Poslední fáze se nazývá prodloužení. Toto je syntéza molekul, která vede ke konečnému výsledku.

Musíte strávit 25-30 takových cyklů, abyste získali určitý počet kopií DNA virů. Kauzální agens nemoci je určují.

Obsah informací a spolehlivost PCR diagnostiky je 100%.

Interpretace výsledků průzkumu

Doba výroby analýzy je asi 5-6 hodin.

Diagnostika metodou PCR dává 2 varianty výsledků:

1. Zjištěno. V materiálu, který byl zkoumán, byla detekována DNA tuberkulózního činidla. Pravděpodobnost infekce je 97%. Takoví pacienti jsou rychle posláni do léčebny TB, kde bude prováděna léčba.
2. Nebyla zjištěna. Negativní odpověď indikuje nepřítomnost původce.

Pokud je výsledek pozitivní, lékař provede podrobné dekódování, které určuje stádium a zaměření onemocnění.

Fotogalerie

Zvláštnosti PCR pro tuberkulózu u dětí

PCR je předepsána, pokud je výsledek testu Mantoux nejistý nebo při nejmenším podezření na infekci. Zajištění postupu je pro děti bezpečné.

Proveditelnost analýzy tuberkulózy moči pomocí PCR

Pokud má Mantu špatný výsledek, použijí se další diagnostické metody. Hlavní věc je identifikovat nemoc a otázku, kolik nákladů na diagnostické vyšetření ustupuje do pozadí. Jedním z nejpřesnějších a nejrozšířenějších v jakémkoliv věku je PCR. Analýza moči tuberkulózy tímto způsobem odhaluje ICD ihned po vstupu do těla. Jaká je metoda a jaké jsou její výhody?

Co je analýza moči pomocí PCR?

Polymerázová řetězová reakce se řídí principem molekulární biologie. Pro prozkoumání moči (nebo jiného biomateriálu) použijte speciální enzymy. Mohou kopírovat DNA mikroorganismů. Odborníci porovnávají materiál s existující základnou a určují, zda se jedná o infekci. Je-li odpověď kladná, stanoví se stupeň infekce a typ patogenu.

Přesnost je zde důležitá, takže laboratorní pracovníci musí mít odpovídající znalosti a dovednosti.

Kromě tuberkulózy PCR diagnostikuje další infekční onemocnění (hepatitida, STI, HIV, kandidóza, borelióza, atd.).

Někteří rodiče se domnívají, že tuto metodu lze použít místo Mantouxu, ale není to tak. Ani jeho vysoký výkon nemůže nahradit vzorek, který je schválen a povinný ve všech předškolních a školských institucích. Poskytnutí výsledku PCR mateřské škole nebo škole nemusí být dostačující k tomu, aby dítě mohlo vstoupit do dětského týmu.

Je tato metoda účinná při diagnostice tuberkulózy?

PCR moči pro tuberkulózu je účinným způsobem detekce patologie, ale někdy se vyskytují falešné výsledky ve vztahu k malým dětem. V tomto případě jsou pozorovány nepřesnosti, protože v moči je mnoho nečistot. Příležitostně se provádějí další vyšetření k potvrzení a potvrzení diagnózy.

Jak vhodná je tato metoda v konkrétním případě, řekne to ftalista. Je to právě tento specialista, který musí nejprve podstoupit konzultaci.

Kontraindikace metody

Neexistují žádné kontraindikace. Provést analýzu:

• u dětí;
• s ARD, ARVI, GRIPpe, spalničkami atd.;
• během alergií atd.

Není vhodné provádět věkovou kategorii od 0 do 3 let kvůli obdržení nespolehlivých výsledků.

Tato metoda vyšetření je volena častěji, protože v ní nejsou kontraindikace a vysoké procento spolehlivých výsledků.

Výhody

Praxe ukazuje, že metoda ospravedlňuje její náklady. Pros pro PCR v moči:

• aby se učinil „verdikt“, neměly by se do těla zavádět žádné léky, protože analýza se provádí v zkumavce v laboratoři;
• bezbolestný;
• pro dosažení výsledků není nutné čekat několik dní, během několika hodin, maximálně jeden den (což nelze očekávat, pokud se provádí kultivace moči);
• identifikuje patogen, i když jiné metody nepřinesly výsledky;
• odhalit nemoc v raném stadiu;
• analýza je vysoce citlivá, proto je obtížné vynechat tuberkulózu;
• falešné výsledky jsou zřídka pozorovány (obvykle chyba neschopnosti zdravotníka nebo nesprávný odběr moči samotným pacientem);
• je detekován infekční agens, i když biomateriál obsahuje minimální množství.

na obsah ↑

Nevýhody

• vysoká cena (ale liší se v závislosti na dolaru a dalších faktorech);
• chybné výsledky (asi 10%).

Falešné odpovědi se objevují z různých důvodů.

1. Pokud byl odběr moči proveden nesprávně, byla doporučení porušena.
2. Když laboratorní pracovník nemá potřebné znalosti k provedení analýzy nebo porušil techniku ​​materiálového výzkumu.
3. Pokud sebraná moč nedostane mykobakterie.
4. V moči hodně nečistot třetích stran, které zkreslují výsledek (obvykle u dětí).

To vše je důvodem pro použití dalších diagnostických opatření.

Příprava na analýzu

Jak močit? Aby se Urin nestal příčinou špatné odpovědi, je nutné provést její správné shromažďování. Příprava je důležitá.

1. Pokud je analýza plánována pro dospělého, pak 1-2 dny před tím musíte zapomenout na pohlavní styk.
2. Je důležité informovat lékaře o antibiotické terapii (pokud byla v posledních týdnech). Musíte počkat alespoň měsíc a teprve pak pokračovat v průzkumu. Jakékoliv léky ovlivní výsledek analýzy.
3. Nejlepší čas na shromáždění je ráno. Předběžná konzumace potravin a nápojů není povolena.
4. Genitálie nejsou předprané.
5. Je důležité zakoupit speciální vakuovou soupravu, ve které bude moč shromažďován. Dejte ji do běžné sklenice a pak ji vylijte. Výsledkem je, že bakterie nebo viry z vnějšího prostředí spadnou do moči, což zabrání dosažení spolehlivého výsledku. Je třeba se vyvarovat kontaktu s vnějším prostředím. Speciální sada se skládá ze sterilní nádoby s víkem, zkumavek a zkumavek.
6. Ve sklenici osoba vyprazdňuje močový měchýř. Je důležité sebrat první porci moči.
7. Po uzavření nádoby a vložení do zkumavky. Bude naplněn samotným obsahem. Ovlivněte tento podtlak.
8. Po naplnění zkumavky se nádoba a zkumavka zlikvidují.
9. Výsledný biomateriál je transportován do laboratoře, kde provede vlastní analýzu. Dodává se pouze trubice s močí.

Pokud pacient z nějakého důvodu není schopen sbírat moč, odborník z kliniky přijde na pomoc. Speciálně vyškolení lidé přijdou se vším, co potřebují, a vše bez chyb.

Jak se tato analýza provádí?

PCR pro tuberkulózu se provádí v několika stupních. Vezměme si každý detailně.

1. Za prvé, molekuly DNA jsou rozděleny do komplementárních vláken zahříváním na vysoké teploty.
2. Potom se do výsledného materiálu zavedou primery. Jeden z jejich typů je komplementární k DNA prvního řetězce (jeho začátek), druhé DNA druhého řetězce (jeho konec). Složení čtyř typů DDNTP je okamžitě přidáno. Dále přichází spojení všech komponent.
3. Směs se zahřívá a do ní se zavádí termostabilní DNA polymeráza. Po ochlazení zkušebních vzorků. To vše se děje v termostatech (termocyklery).
4. Nakonec odborník vyhodnotí získané výsledky. To se provádí pomocí speciálního gelu se světelnými ultrafialovými paprsky. Získaný elektroforegram se analyzuje a výsledek se stanoví.

Zařízení, s nímž se provádí analýza, je drahé a není všude.

Výsledky dekódování

Výsledek může dekódovat pouze kvalifikovaný odborník. To zohledňuje věk pacienta. Odpověď je založena na množství patogenů přítomných ve vzorku.

Mohou existovat dvě odpovědi:

Pozitivní znamená, že v moči je IBC. To je důvod, proč buď podstoupit další diagnostiku (v případě potřeby), nebo zahájit léčbu tuberkulózy. Děti mají obvykle falešné výsledky, proto předepisují jiné metody vyšetření, které diagnózu potvrzují.

Když obdržíte negativní odpověď, můžete být klidní, není zde žádná infekce. V přítomnosti příznaků, které naznačují něco jiného, ​​vyšetření nekončí.

Poté, co laboratorní dělník rozluštil výsledek, je papír, na který je uvedena odpověď, zaslán úzkému specialistovi, který dal pokyn k analýze. Lékař TBC tento dokument studuje, na základě čehož rozhoduje, co dál.

Analýza nákladů v různých centrech

Níže naleznete informace o přibližných cenách PCR v moči v lékařských laboratořích. Pro srovnání uvádíme tři populární instituce.

PCR diagnostika tuberkulózy u dětí a dospělých: indikace pro

Světová zdravotnická organizace uznala před 20 lety, že míra šíření tuberkulózy byla mimo kontrolu a dosáhla rozsahu epidemie. Od té doby se situace nezlepšila. Každý rok je diagnostikováno více než milion případů onemocnění, z nichž téměř čtvrtina je smrtelných. V posledním desetiletí se incidence u dětí zvýšila, většina forem nemoci není vhodná pro standardní léčbu antibiotiky.

Dnes je jedním z globálních úkolů v medicíně vývoj takových diagnostických metod, které umožní identifikovat patologii před nástupem výrazných klinických příznaků. Jedním z nich je polymerázová řetězová reakce (PCR) pro tuberkulózu, která pomáhá detekovat tyčinky způsobující Kochovu chorobu v krvi, sputu a dalších biologických tekutinách.

Diagnóza tuberkulózy

Screeningové testy jsou zaměřeny na detekci pacientů, nosičů tuberkulózy a prevenci šíření infekce ve společnosti. Pro děti mladší 14 let se masivně používá test Mantoux. Jde o imunologický test, při němž se dávka tuberkulínu podkoží injektuje - což je komplexní směs genetického materiálu několika typů mykobakterií. Výskyt výrazné reakce indikuje aktivně se vyskytující infekční proces.

Pro preventivní vyšetření u dospělých s použitím fluorografie nebo rentgenového záření. Tyto metody pomáhají zviditelnit patologické léze v plicní tkáni. Způsobuje však obtíže při diferenciaci tuberkulózy od jiné organické patologie (maligní a benigní neoplazmy, zánětlivé procesy, parazitární invaze, profesionální poškození plic).

Pro objasnění struktury a velikosti patologického zaměření mohou být zapotřebí další instrumentální studie:

• cílená radiografie;
• počítačová tomografie;
• zobrazování magnetickou rezonancí.

Metody diagnostiky tuberkulózy

V případě pochybných výsledků a při stanovení adekvátní terapie je zapotřebí přesnějších diagnostických metod, které umožní izolovat patogen. Mikroskopické a bakteriologické vyšetření sputa se používá k dlouhodobému potvrzení plicních forem tuberkulózy.

V posledních letech je výskyt mykobakterií různých orgánů a systémů - ledvin, kostí, střev, kůže - stále častější. K identifikaci těchto forem tuberkulózy, ultrazvukového vyšetření, kultury moči a stolice lze použít endoskopické vyšetření.

PCR diagnostika tuberkulózy pomůže potvrdit přítomnost Kochových tyčinek v krvi, stejně jako její citlivost na určité léky. Jedná se o vysoce účinnou metodu založenou na detekci bakteriálního genetického materiálu v různých biologických tekutinách.

Specifičnost a indikace

Polymerázová řetězová reakce je vysoce citlivá mikrobiologická diagnostická metoda založená na principech genetického inženýrství. Pro potvrzení přítomnosti patogenu v biologickém materiálu je postačující pro tento fragment detekovat jedinečný fragment nukleové kyseliny. PCR pro tuberkulózu může detekovat bakterie v krvi, sputu, moči.

V současné době vyvinula několik metod analýzy. Mezi nejoblíbenější patří:

• PCR v reálném čase;
• mikrofluidní technologie;
• sekvenování a pyrosekvenování.

PCR v reálném čase

Laboratoře nejčastěji využívají polymerázovou řetězovou reakci v reálném čase, protože snižuje počet falešně pozitivních výsledků a samotný proces analýzy trvá krátkou dobu.

Vzhledem k velkému počtu skrytých forem onemocnění a neúčinnosti standardních diagnostických metod se stále více používá PCR. Účel této analýzy je uveden na adrese:

• identifikaci podezřelých oblastí na rentgenovém snímku;
• pochybné výsledky tuberkulinového testu;
• nemožnost provádět mikroskopickou a bakteriologickou analýzu sputa u osob ve vážném stavu;
• provádění chirurgických zákroků, pokud je nutné rychle zajistit, že nedochází k infekci;
• nepřípustnost použití fluorografie, rentgenového záření nebo počítačové tomografie (například u těhotných žen a kojení v případech nadměrného ozáření);
• podezření na extrapulmonální tuberkulózu (doporučuje se použít nejen krev, ale i hlen).

PCR diagnostika tuberkulózy se osvědčila při vyšetření dětí z důvodu nedostatku dodatečné expozice a rychlých výsledků.

Postup přípravy a analýzy

Není nutná speciální příprava na krevní PCR. Aby se však předešlo komplikacím odběru vzorků krve a aby se získal kvalitní materiál, je třeba dodržovat následující obecná pravidla:

• analýza by měla být provedena ráno ne dříve než 2 hodiny po probuzení;
• Mělo by omezit příjem mastných a smažených potravin denně před odběrem krve;
• zdržujte se jídla, čaje a kávy po dobu 8-9 hodin, je dovoleno pít čistou vodu;
• Nekuřte nejméně 3-4 hodiny.

V případě trvalého léčení (hormony, antikoagulancia, protizánětlivá léčiva, antibiotika, ředidla krve) byste o tom měli informovat asistenta laboratoře.

Při aplikaci sputa byste měli dobře čistit zuby a několikrát si vypláchnout ústa. Materiál odeberte ve sterilní nádobě. Pro dosažení lepších výsledků lze večer použít expektoranci nebo mukolytikum.

Diagnóza se skládá z několika fází.

Plotový materiál. Lze jej provádět v laboratoři i na dálku. Některé typy materiálu, které pacient sbírá nezávisle (moč, hlen).

Zničení struktury nukleových kyselin (denaturace molekul DNA a RNA). K tomu se testovaný materiál zahřívá na teplotu 98 ° C a udržuje se několik minut. Výsledkem je, že se dvojitá šroubovice uvolní, vytvoří se jednovláknové molekuly.

Žíhání Po přidání primeru (krátký úsek nukleové kyseliny) teplota klesne o několik stupňů, aktivuje se polymeráza.

Elogace. Teplota je nastavena na optimální úroveň, enzymová aktivita dosahuje maxima a druhý řetězec je dokončen v souladu s Chargaffovým pravidlem komplementarity.

Pro dokončení studie je nezbytné syntetizovat požadovaný počet molekul DNA - asi 50 cyklů výše uvedené reakce. To trvá asi 2-3 hodiny. Pozitivní výsledek reakce neznamená vždy aktivní stadium onemocnění, ale je indikátorem přítomnosti mikroorganismu v těle.

Výhody a nevýhody metody

Ve srovnání s jinými mikrobiologickými metodami, PCR nepotrvá dlouho, než detekuje Mycobacterium tuberculosis pomocí PCR, výsledek lze získat v den testování.

Další výhodou je vysoká specifičnost analýzy, která umožňuje detekci přítomnosti patogenu s přesností 90-95% v téměř každém biomateriálu (krev, moč, výkaly, mozkomíšní mok, sputum, návaly průdušek).

Existuje však několik nevýhod metody:

• poměrně vysoké procento falešně pozitivních výsledků (až 15%), což je spojeno s detekcí neživých mikroorganismů;
• v některých případech můžete tuto skutečnost vynechat, protože Mycobacterium tuberculosis je často vystavena mutacím a změnám genetického materiálu;
• nízká účinnost při vyšetření osob s imunodeficiencí;
• vysoké náklady na výzkum, potřeba drahých zařízení a činidel.

Co lze vyměnit?

Vzhledem k rozmanitosti forem infekce tuberkulózy je pro přesnější diagnózu a volbu léčby nutné kombinovat několik diagnostických studií:

Povinná analýza pro děti je Mantoux test. Pokud se zavedení tuberkulínu (genetický materiál mykobakterií) projeví výraznou reakcí, lze předpokládat infekci tuberkulózním bacilem.

Pro vizualizaci patologického fokusu lze použít rentgenové metody. V diagnostice extrapulmonální tuberkulózy se používají endoskopické metody při současné biopsii:

• bronchoskopie pomáhá identifikovat léze hrtanu, průdušnice, průdušek;
• kolonoskopie - střeva;
• cystouretroskopie - orgány močového systému;
• hysteroskopie - ženské genitálie. Tyto metody nejsou specifické, pro stanovení přesné diagnózy by měl být identifikován patogen.

Obecné klinické testy pomohou specifičtěji určit stav těla. Vyžaduje se kompletní krevní obraz s leukocytárním vzorcem.

Zvýšení počtu neutrofilů se sníženou hladinou lymfocytů a zvýšení rychlosti sedimentace erytrocytů (ESR) indikuje aktivní zánětlivý proces bakteriální etiologie. Vyloučit poškození orgánů močového systému pomocí obecné analýzy moči a kultury pro sterilitu.

PCR je v současné době dostupná ve většině soukromých laboratoří. To vyžaduje nejen vysoce kvalifikované odborníky, ale také drahé vybavení, velký počet činidel. Použití této metody je proto i přes vysokou přesnost a specifičnost omezené.

PCR diagnostika tuberkulózy

Tuberkulóza je specifická infekce, její zaměření může být v lidských tkáních po celá léta a pak se šíří několik měsíců. Jedná se o chronické onemocnění, jehož optimální léčebné režimy je obtížné vybrat. Jedním z důvodů je pozdní diagnostika, kdy se mykobakterie, zatímco v lidském těle, již přizpůsobily mnoha lékům.

Jaké moderní metody diagnózy existují? PCR diagnostika - co to je? Jaký je tento výzkum? V jakých případech je tuberkulóza diagnostikována touto metodou a jaká je její podstata?

Co je to PCR diagnostika

Je to jedna z nejmodernějších metod diagnostiky nejen nemocí, ale také detekce biologického materiálu. PCR diagnostika byla vynalezena relativně nedávno. Asi před 30 lety v roce 1983, americký biochemik, Carey Banks Mullis, navrhl komplexní schéma obnovy biologického materiálu mikroorganismů v jednom krátkém segmentu. Díky jeho objevu získal vědec nejvyšší cenu - Nobelovu cenu.

Co je to - PCR diagnostika infekcí? Polymerázová řetězová reakce (PCR) je diagnóza detekce virových onemocnění, založená na metodách genetického inženýrství. Je široce používán v lékařské mikrobiologii, imunologii a virologii. Metoda je univerzální a pomáhá diagnostikovat malé množství materiálu. Infekce může být detekována doslova v prvních hodinách infekce, dlouho předtím, než se objeví první příznaky onemocnění.

Metoda spočívá v tom, že z materiálu od nemocného není získán samotný patogen, nýbrž fragmenty genomu (částice DNA), jeho biosyntéza s následným určením, do které třídy mikroorganismů získaný genetický materiál patří, pomocí molekulárně genetických metod.

Navzdory skutečnosti, že se jedná o komplexní proces, trvá mnohem méně času než mnoho biologických metod detekce infekčních agens. Během několika hodin lze pomocí PCR detekovat mikroorganismus. K tomu není nutné izolovat ji od prostředí (krev, mozkomíšní mok, sputum) a pěstovat ji po dlouhou dobu na umělých živných médiích. Stačí, když je ve studovaném materiálu přítomen malý fragment řetězce DNA infekčního činidla.

Základem reakce je možnost za umělých podmínek (in vitro) vytvořit syntézu molekul nukleové kyseliny infekčního agens.

Co je potřeba pro PCR?

1. Primery jsou segmenty DNA, ze kterých začíná biosyntéza nebo tvorba.
2. Nukleotidy nebo komplexní sloučeniny, které jsou základem molekuly DNA nebo RNA.
3. Polymerázová řetězová reakce není možná bez přítomnosti polymerázy, což je enzym urychlující PCR.

Fáze diagnostiky PCR

Jak probíhá molekulární diagnostika pomocí PCR? Postup je jednoduchý a trvá krátkou dobu s ohledem na sběr materiálu.

1. Před zahájením studie si vezmou potřebný biologický materiál - to je voda z průdušek, krev, obsah žaludku, sputum. Typ biologického materiálu závisí na podezřelém patogenu.
2. Denaturace nebo zničení primární struktury DNA, která se skládá ze dvou řetězců. Podstatou této fáze je oddělení dvou řetězců pod vlivem vysoké teploty (maximum je 98 ° C, které trvá ne déle než dvě minuty).
3. V dalším stadiu PCR, zvaném annealing, se teplota sníží o několik stupňů, takže se primer naváže na DNA řetězec.
4. Prodloužení, během kterého probíhá syntéza požadovaných molekul přímo.

Výsledkem je, že pouze 25–30 takových cyklů obdrží potřebný počet kopií DNA mikroorganismu, které lze snadno rozpoznat.

Vyžaduje PCR diagnózu tuberkulózy?

Není možné, aby všichni lidé s podezřením na tuberkulózu prováděli PCR, protože tento způsob vyžaduje drahé vybavení. Ne všechny veřejné kliniky si to mohou dovolit koupit. Navíc se tak stalo, že obvyklé metody diagnostiky infekce ve většině případů se také ospravedlňují.

Patří mezi ně:

• průzkum pacientů, historie;
• úplné vyšetření osoby;
• studie s použitím tuberkulinového testu Mantoux;
• radiografie nebo fluorografie;
• počítačová diagnostika v případě potřeby;
• metody mikrobiologického výzkumu: mikroskopická analýza a bakteriologické vyšetření sputa.

PCR pro tuberkulózu se provádí ve zvláštních případech, kdy je obtížné stanovit diagnózu nebo není možné provádět jiné instrumentální metody.

I přes hojnost diagnostických metod stále roste výskyt tuberkulózy. V současné době nejde jen o jeho růst, ale i další funkce:

• onemocnění se často vyskytuje v těžké formě;
• počet smrtelných případů se zvyšuje;
• stále odolnější vůči moderní chemoterapii jsou diagnostikovány formy onemocnění.

Neochota samotných lidí každoročně podstoupit rutinní lékařská vyšetření, odmítnutí očkování vede k šíření tuberkulózy. V takových podmínkách potřebujeme rychlé, informativní a účinné výzkumné metody, které by měly být přístupné dětem i dospělým. Všechny výše uvedené diagnostické metody jsou mnohem horší než PCR.

Výhody diagnostiky tuberkulózy pomocí PCR

Tento výzkum, i když nový, se osvědčil, zejména v kontroverzních případech, kdy není možné provést diagnózu z několika důvodů.

Díky PCR je mnohem snazší detekovat původce tuberkulózy v testovaném materiálu.

Výhody PCR diagnostiky jsou následující.

1. Jedná se o rychlou analýzu. Malý fragment molekuly DNA může být použit k diagnostice během pouhých několika hodin (asi pět), která se úspěšně používá v nouzových situacích, kdy například před operací je nutné určit, zda je člověk nemocný tuberkulózou.
2. PCR analýza je povolena v případě, kdy jsou jiné metody nedostupné nebo zakázané (pro detekci plicní tuberkulózy, někdy musíte vzít několik radiografických snímků, což bude velká dávka záření).
3. Pomocí PCR se vyšetřuje biologické prostředí na přítomnost patogenu. Například můžete provést studii mozkomíšního moku, pokud existuje podezření na tuberkulózní meningitidu.
4. Povolena PCR diagnostika infekčních onemocnění u dětí, protože metoda je bezpečná.
5. Umožňuje identifikovat patogen v jakékoli fázi onemocnění.
6. Vysoká citlivost PCR umožňuje detekci Mycobacterium tuberculosis, i když je v biologickém materiálu pouze několik mikroorganismů.
7. Je dobré provádět diagnózu recidivy onemocnění.

Přečtená PCR se zdá být téměř dokonalou diagnostickou metodou, která by měla mít podezření na tuberkulózu. Existují však i nevýhody, které je třeba vzít v úvahu.

Nevýhody PCR v diagnostice tuberkulózy

V naší době je taková diagnostika vzácnější než pravidelnost. A pro to je důvod.

1. Jedná se o nákladnou výzkumnou metodu. Na mnoha klinikách chybí vybavení pro PCR kvůli jeho vysokým nákladům, ale analýza může být stále prováděna v placených laboratořích.
2. Ihned po ošetření mohou být v lidském těle stále přítomny mrtvé mykobakterie nebo žijící v malých množstvích (výsledek bude pozitivní během diagnostiky PCR), takže metoda bude v této době nespolehlivá, nemá smysl ji provádět.
3. Výsledkem mutací mykobakterií je neúčinná PCR - nelze syntetizovat normální sekvenci řetězce DNA.
4. Je nutné zvolit správné prostředí pro studii, krev je odebírána pouze v případě, že je podezřelá z infekce (sepse), není třeba brát sputum, pokud existuje otázka tuberkulózy orgánů nervového systému. V tomto případě nebude PCR schopna detekovat patogen a diagnóza bude neinformativní.

Indikace pro detekci tuberkulózy pomocí PCR analýzy

PCR diagnostika tuberkulózy se provádí nejčastěji v kontroverzních případech. Kdy lékaři tuto studii doporučují?

1. Pokud je obtížné provést diagnózu obvyklými dostupnými metodami, byl kontakt s pacientem s tuberkulózou.
2. V případě, že osoba nemůže být doručena na kliniku, aby podstoupila rutinní rutinní testy na tuberkulózu, je snazší jej vyšetřit pomocí PCR, protože sputum pro test může být dodáno do nádoby a diagnóza je potvrzena během několika hodin.
3. Pokud má člověk nouzovou operaci a je naléhavé zjistit, zda je nemocný tuberkulózou.
4. Pokud je to nutné, těhotná žena je také lepší vyšetřit na tuberkulózu pomocí PCR, protože metoda je bezpečná.
5. Každý, kdo nebyl diagnostikován tuberkulózou, byl na základě placení potvrzen bakteriologickými metodami a fluoroskopií. To se děje, když je léze v plicích nepostřehnutelná v přímém obraze, a osoba, která během studie dodala sputum, nemohla dodržovat doporučení pro správný sběr materiálu. V tomto případě se člověk obává všech příznaků charakteristických pro plicní tuberkulózu.
6. Když existují pochybnosti o výsledcích testu Mantoux.
7. Je vhodnější provést PCR diagnostiku tuberkulózy u dětí. Tento postup je bezpečný, nevytváří další ozáření a je účinný při detekci obtížně diagnostikovatelných forem onemocnění.

Včasná diagnóza tuberkulózy je klíčem k řádně předepsané léčbě a snížení šíření nemoci. Často známé metody detekce onemocnění nejsou vždy účinné. Proto je dnes PCR jednou z nejspolehlivějších a nejbezpečnějších způsobů detekce infekce v raných fázích jejího vývoje.

Kdy a kdo je předepsán močový test na tuberkulózu

Tuberkulóza je infikována bez ohledu na sociální status, věk a místo bydliště. Kromě standardních metod, jako je tuberkulinová diagnóza a FLG, mohou fizizaktoři předepsat test na vyšetření infekce moči na tuberkulózu.

Obecné informace

Infekce ledvin je druhým nejčastějším onemocněním po plicní formě onemocnění. Většinou se vyvíjí u lidí se zanedbávanými lézemi plic nebo kostí v důsledku infekce krví. Předurčuje k sedimentaci bakterií v tkáních urogenitálního traktu porušením urodynamiky nebo lokálního krevního oběhu.

Kochovy zdravé kuličky obvykle neproniknou. Přítomnost těchto bakterií v moči se stává spolehlivým znakem tuberkulózy, která ji odlišuje od jiných infekcí, pro které jsou přípustné nižší hranice přítomnosti.

Příprava na analýzy

Požadavky, které se provádějí před užitím OAM (urinalýza):

• ihned po probuzení použijte středně získanou moč;
• materiál se shromáždí v čisté nádobě v množství 50-100 ml;
• před použitím bez použití detergentů omyjte vnější genitálie;
• Výsledný materiál je dodán do laboratoře nejpozději do 10-11 hodin (méně než 2 hodiny po analýze).

Sběr moči pro bakterioskopii a setí se provádí podle stejných pravidel, ale přísnější požadavky jsou kladeny na nádoby na moč. Musí být přísně sterilní, proto se nedoporučují dotýkat se jejich vnitřního povrchu a okrajů a ihned po naplnění víko zavřete. Před dodáním do laboratoře je shromážděný materiál uložen v chladničce.

Před analýzou moči se doporučuje omezit konzumaci barviv na 1-2 dny: mrkev, řepa, borůvky.

Může změnit ukazatele moči a její barvu: antituberkulóza (rifampicin), diuretika, antivirotika, kyselina acetylsalicylová, komplexy vitamín-minerální látky atd.

Ženy by měly být testovány v nepřítomnosti menstruačního krvácení.

V jakých případech předepsat analýzu

Tuberkulózní poškození ledvin nemá specifické symptomy, takže pacienti budou léčeni dlouhou dobu, ale bez trvalého účinku, s různými urologickými nebo gynekologickými diagnózami:

• cystitida;
• prostatitis;
• pyelitis;
• pyelonefritida;
• salpingoophoritis;
• urolitiázy.

Pokud již byla osoba diagnostikována s plicní infekcí, pak se v přítomnosti příznaků poškození urogenitálního systému provádí třikrát analýza moči na tuberkulózu ledvin. Mezi příznaky onemocnění, které indikuje infekci Kochovými tyčinkami, patří následující stížnosti:

• bolesti zad;
• dysurie;
• propuštění krve nebo hnisu v moči.

Močový test na plicní tuberkulózu převážně neurčuje žádné změny, a když jsou tkáně urogenitálního systému zapojeny do procesu, laboratoř zjistí odchylky v ukazatelích, které umožňují podezření na diagnózu tuberkulózy:

• pH nižší než 4,0;
• zvýšení počtu leukocytů a červených krvinek;
• nehty podobné leukocyty v moči;
• pozitivní reakce na protein;
• hnis v moči, zejména bez bakteriálního vylučování.

Krevní testy také odhalily nespecifické změny: anémie, leukocytóza. S těmito změnami může být nezbytné další vyšetření pacienta. U mužů jsou recidivující symptomy lézí prostaty považovány za podezřelé z tuberkulózy, když je močení obtížné, žláza je zvětšena nebo vrásčitá a hnis nebo krev se spermiemi jsou uvolňovány po dlouhou dobu.

Detekce tuberkulózy nevylučuje její současný vývoj na pozadí jiných patologických stavů močových orgánů.

Definice tuberkulárního bacillu

Pokud je podezření na infekci ledvinami Mycobacterium, odborník vám předepíše komplex studií, včetně obecných testů krve a moči, testu Mantoux pro dítě, rentgenové diagnostiky, ultrazvuku, CT, MRI. Pozitivní analýza moči na Mycobacterium tuberculosis však bude bezpodmínečným potvrzením přítomnosti infekce.

Pro detekci patogenu nebo jeho antigenního materiálu se používají následující metody:

1. Mikroskopie podle Ziehl-Nielsen. Po odbarvení materiálu kyselinou sírovou se barva obarví methylenovou modří. Mycobacterium tuberculosis, když se obarví, se stává karmínovým a vyniká na pozadí modrých buněk. To je způsobeno odolností Kochových tyčinek vůči působení kyselin. Pro zlepšení přesnosti stanovení se doporučuje odebírat moč pomocí katétru.
2. Fluorescenční mikroskopie - při barvení auromin Koch hůlkami svítí oranžově žlutá barva. Citlivost je vyšší než při barvení Ziehl-Nielsenem.
3. Bakteriologické vyšetření - kultivace moči na živném médiu (často se používá krev nebo brambor). Jakmile jsou příznivé podmínky, tyčinky se začnou množit. Je to ale dlouhý proces a může trvat od 20 dnů do 3 měsíců. Odolnost vůči lékům proti tuberkulóze je možné stanovit.
4. Biologický vzorek - založený na detekci mykobakterií ve tkáních morčete po subkutánní injekci studované moči. Tato studie vyžaduje určitý čas: příušnice jsou usmrceny a pitvány asi za měsíc, pokud nezemřela dříve. Nebo pro dřívější diagnózu se zvíře podrobí tuberkulinovému testu.
5. Polymerázová řetězová reakce - pomocí citlivých systémů jsou v moči detekovány specifické části Kochovy DNA.

V některých případech se provokativní test provádí subkutánní injekcí tuberkulínu v dávce 20-100 TE nebo ozářením kůže infračerveným laserem. V prvním případě se opakované testy moči provádějí po 24 a 48 hodinách a porovnávají se s počátečním, ve druhém případě - po 10 dnech. Pozitivní je výsledek, charakterizovaný zvýšením počtu červených krvinek a bílých krvinek v moči, vylučováním mykobakterií.

Účinnost metody

U tuberkulózního poškození ledvin dochází u více než 60% pacientů ke změně celkové analýzy moči. Detekce mykobakterií v bakterioskopii potvrzuje diagnózu, ale specifičnost této metody nepřesahuje 80% (citlivost při barvení podle Ziehl-Nielsen je více než 100 000 mikrobiálních buněk v 1 ml a ve fluorescenční studii více než 10 000 v 1 ml).

Citlivější výsev na životní prostředí, ale příliš dlouhý. Před nimi vyhrává PCR pro tuberkulózu:

• výsledek se získá za 4-5 hodin;
• vysoká citlivost;
• určuje DNA mykobakterií v moči, a to i při plicní tuberkulóze a absenci specifického procesu v ledvinách;
• schopnost určit citlivost na léčivo.

Může přiřadit tuto studii namísto Mantouxu u dětí, pokud je podezření na extrapulmonální tuberkulózu, existuje alergie na tuberkulín nebo tělo dítěte nevytváří protilátky proti patogenu, pokud je v těle přítomno. Existuje však malé procento jak falešně negativních, tak falešně pozitivních výsledků.

Pravděpodobnost nesprávného negativního výsledku se zvyšuje u pacientů, kteří dlouhodobě léčí onemocnění urogenitálního traktu antibiotiky. Léky jako fluorochinolony a aminoglykosidy inhibují růst Kochových tyčinek, ale nezabíjejí je až do konce. I když jedna metoda ukázala negativní výsledek, diagnóza tuberkulózy je i nadále pravděpodobná, takže lékaři používají pro ověření soubor testů a instrumentálních vyšetření.