Jak provést analýzu pomocí PCR: popis postupu

Faryngitida

Polymerázová řetězová reakce je známa již 30 let. To je široce používané v mnoha oblastech, od archeologie k genetice.

Je to metoda PCR, která pomáhá zavést otcovství, ale nejčastěji se používá k identifikaci různých infekčních onemocnění v lidském těle.

Jak se provádí analýza PCR a co je to? Pokusíme se na tyto otázky odpovědět podrobně.

PCR analýza - co to je?

Polymerázová řetězová reakce (PCR) je vysoce přesná metoda molekulárně genetické diagnostiky, která umožňuje detekovat různá infekční a dědičná onemocnění u lidí, a to jak v akutních, tak chronických stadiích, a dlouho předtím, než se onemocnění může projevit.

Metoda PCR je zcela specifická a správně provedená nemůže dát falešně pozitivní výsledek. To znamená, že pokud není infekce, analýza nikdy neukáže, co to je. Proto je nyní velmi často pro schvalování diagnózy prováděna další analýza PCR, aby se určil původce a jeho povaha.

Polymerázová řetězová reakce (PCR) v roce 1983, vyvinutá Carey Mulllisem (USA), za kterou v roce 1993 získal Nobelovu cenu za chemii.

Jaká je výhoda této metody?

Diagnóza touto metodou umožňuje najít patogen přímo v genu, který je obsažen ve studovaných materiálech. Jedná se o nejpřesnější analýzu genitálních infekcí, skrytých infekcí, různých pohlavně přenosných nemocí.

Rozdíly PCR diagnostika z jiných metod laboratorního výzkumu je následující:

  • metoda je zaměřena na identifikaci samotného patogenu;
  • Diagnostika PCR je univerzální: pro detekci několika patogenů;
  • je dostatečný pouze jeden biologický vzorek pacienta;
  • metoda je vysoce citlivá a není provázena jinými křížovými reakcemi.

Výhodou PCR diagnostiky je také to, že jakýkoliv biologický materiál pacienta je vhodný pro analýzu: krev, výtok z genitálií, moč, sperma.

Jaké infekce mohou odhalit škvrnu na PCR?

V těle může být přítomen velký počet patogenů, včetně „skrytých“, které se dlouhodobě neprojevují.

Analýza rozkladu pomocí PCR umožňuje odhalit tyto infekce:

Zkušební materiál pro PCR je obvykle sputum, sliny, moč a krev. Před analýzou se na to musíte pečlivě připravit, po konzultaci s lékařem.

Krev pro PCR se obvykle podává na prázdný žaludek. Dobré výsledky ukazují analýzu, kdy je materiál pro studii odebírán z cervikálního kanálu nebo uretry. V tomto případě je nejlepší provést PCR diagnostiku nejpozději jeden den po pohlavním styku.

Odrůdy PCR

PCR se používá v mnoha oblastech pro analýzu a vědecké experimenty. Existují různé metody analýzy:

  1. Reverzní transkripce PCR (reverzní transkripce PCR, RT-PCR (angličtina)) se používá k amplifikaci, izolaci nebo identifikaci známé sekvence z knihovny RNA.
  2. Inverzní PCR (Inverzní PCR (Eng.)) - se používá, pokud je známá pouze malá část v rámci požadované sekvence. Tato metoda je obzvláště užitečná, když je nezbytné stanovit sousední sekvence po vložení DNA do genomu.
  3. Nested PCR (Nested PCR) se používá ke snížení počtu vedlejších produktů reakce. Použijí se dva páry primerů a provedou se dvě po sobě následující reakce.
  4. Asymetrická PCR (Asymmetric PCR) se provádí, když je nutné amplifikovat převážně jeden z řetězců původní DNA. Používá se v některých sekvenčních a hybridizačních testech.
  5. Kvantitativní PCR (kvantitativní PCR, Q-PCR (angl.)) Nebo v reálném čase PCR se používá k přímému monitorování měření množství specifického produktu PCR v každém reakčním cyklu.
  6. Krok PCR (Touchdown PCR (Eng.)) - pomocí tohoto přístupu snižuje účinek nespecifické vazby primerů.
  7. PCR specifická pro jednotlivé skupiny (PCR specifická pro skupinu) - PCR pro příbuzné sekvence v rámci jednoho nebo mezi různými druhy za použití konzervativních primerů pro tyto sekvence.

Pokud je nukleotidová sekvence matice částečně nebo neznámá, je možné použít degenerované primery, jejichž sekvence obsahuje degenerované pozice, ve kterých mohou být umístěny jakékoliv báze. Například sekvence primeru může být:... ATH..., kde H je A, T nebo C.

Jaké biologické materiály jsou zkoumány?

Materiál pro PCR studie, ve kterých lze detekovat cizí bakteriální DNA nebo DNA nebo RNA viru, se může skládat z různých biologických médií a lidských tekutin:

  1. Moč. Může být použit pro infekci urogenitálního traktu u mužů a močových orgánů u žen (u mužů, použití moči jako materiálu nahrazuje epiteliální škrábání).
  2. Hlen. Používá se k diagnostice tuberkulózy a méně často k diagnostice respiračních forem chlamydií a mykoplazmózy. Sputum v množství 15 až 20 ml se shromáždí ve sterilní (jednorázové) lahvi.
  3. Biologické tekutiny. Prostata, pleurální, cerebrospinální, amniotická, kloubní tekutina, bronchoalveolární laváže, sliny se užívají podle indikací.
  4. Epiteliální šrot ze sliznic. Běžně se používá k diagnostice pohlavně přenosných nemocí (STD), jako je kapavka, chlamydie, mykoplazmóza, ureaplasmóza, trichomoniáza, gardnerellezis, herpetické a jiné infekce, které ovlivňují sliznice.
  5. Biopsie. Nejčastěji používané biopsie žaludku a dvanáctníku pro identifikaci infekce Helicobacter pylori.
  6. Krev, plazma, sérum. Používá se pro PCR analýzu hepatitidy B, C, D, G virů, herpes, CMV, HIV, lidských genů.

Jak se připravit na analýzu?

Spolehlivost výsledku PCR je přímo závislá na správnosti podání materiálu pro vyšetření. Materiál by neměl být kontaminován, jinak nebude výsledek studie objektivní. Nejdůležitější doporučení před odesláním analýzy PCR jsou následující požadavky:

  1. Moč se podává ráno ve sterilní nádobě.
  2. Krevní test na infekci musí být užíván na prázdný žaludek ráno.
  3. Není nutné zobrazovat sexuální aktivitu den před analýzou.

Výsledek analýzy bude připraven za 1,5-2 dny po zákroku. Tam jsou takové situace, kdy výsledek může být připraven ve stejný den.

Dekódování analýzy CRP

Proces interpretace prezentovaného výzkumu se vyznačuje jednoduchostí. Výsledky PCR analýzy mohou být získány za 1,5 až 2 dny po dodání materiálu. V některých případech je výsledek připraven hned první den, a to je to, co mohou znamenat:

  • Negativní výsledek ukazuje, že v diagnostikovaném materiálu chybí infekční agens.
  • Pcr pozitivní znamená, že DNA nebo RNA patogenu je přítomna v lidském těle.

V některých případech produkují kvantitativní stanovení mikroorganismů. To platí zejména pro nemoci způsobené oportunistickými mikroorganismy. Vzhledem k tomu, že tyto bakterie vykazují negativní vliv pouze s nadměrným množstvím.

Kvantitativní analýza PCR je také důležitá pro volbu terapeutické taktiky a pro kontrolu léčby virových infekcí, jako jsou viry HIV a hepatitidy.

Jak přesná je PCR diagnostika infekcí?

Metoda PCR se vyznačuje vysokou přesností, specificitou a citlivostí. To znamená, že tato analýza je schopna:

  • přesně určit přítomnost nebo nepřítomnost infekce;
  • specifikujte přesně, jaký druh infekce (specificita);
  • detekci infekce i při velmi nízkém obsahu DNA mikrobů v biologickém materiálu,
  • který byl podroben výzkumu (citlivost).

PCR analýza: cena a čas

Cena konkrétní analýzy bude záviset na tom, na kterou infekci jste zkontrolována. Orientační ceny a podmínky:

  1. STI: 300-500 rublů, čas - 1 den;
  2. Epstein-Barr virus, lidský papilomavir, herpes virus, cytomegalovirus: 300-500 rublů, termíny - 1 den;
  3. Hepatitida A, B, C, D, G: kvalitativní analýza 650 rublů, kvantitativní analýza 2000 rublů. Podmínky - do 5 dnů;
  4. Protilátky proti viru hepatitidy C, celkem (Anti-HCV) - 420 rublů;
  5. Protilátky proti viru hepatitidy C, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rublů;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rublů, termíny - 1 den;
  7. HIV (protilátky a antigeny) - 380 rublů;
  8. HIV RNA, kvalitativně - 3500 rublů;
  9. HIV RNA, kvantitativně - 11.000 rublů.

Chcete-li ušetřit peníze, můžete zvolit pevnou dávku analýz. Tato služba je poskytována většinou klinik, kde je možné předat analýzu metodou ERP (invitro, onclinics atd.)

PCR diagnostika tuberkulózy

Tuberkulóza je specifická infekce, její zaměření může být v lidských tkáních po celá léta a pak se šíří několik měsíců. Jedná se o chronické onemocnění, jehož optimální léčebné režimy je obtížné vybrat. Jedním z důvodů je pozdní diagnostika, kdy se mykobakterie, zatímco v lidském těle, již přizpůsobily mnoha lékům.

Jaké moderní metody diagnózy existují? PCR diagnostika - co to je? Jaký je tento výzkum? V jakých případech je tuberkulóza diagnostikována touto metodou a jaká je její podstata?

Co je to PCR diagnostika

Je to jedna z nejmodernějších metod diagnostiky nejen nemocí, ale také detekce biologického materiálu. PCR diagnostika byla vynalezena relativně nedávno. Asi před 30 lety v roce 1983, americký biochemik, Carey Banks Mullis, navrhl komplexní schéma obnovy biologického materiálu mikroorganismů v jednom krátkém segmentu. Díky jeho objevu získal vědec nejvyšší cenu - Nobelovu cenu.

Co je to - PCR diagnostika infekcí? Polymerázová řetězová reakce (PCR) je diagnóza detekce virových onemocnění, založená na metodách genetického inženýrství. Je široce používán v lékařské mikrobiologii, imunologii a virologii. Metoda je univerzální a pomáhá diagnostikovat malé množství materiálu. Infekce může být detekována doslova v prvních hodinách infekce, dlouho předtím, než se objeví první příznaky onemocnění.

Metoda spočívá v tom, že z materiálu od nemocného není získán samotný patogen, nýbrž fragmenty genomu (částice DNA), jeho biosyntéza s následným určením, do které třídy mikroorganismů získaný genetický materiál patří, pomocí molekulárně genetických metod.

Navzdory skutečnosti, že se jedná o komplexní proces, trvá mnohem méně času než mnoho biologických metod detekce infekčních agens. Během několika hodin lze pomocí PCR detekovat mikroorganismus. K tomu není nutné izolovat ji od prostředí (krev, mozkomíšní mok, sputum) a pěstovat ji po dlouhou dobu na umělých živných médiích. Stačí, když je ve studovaném materiálu přítomen malý fragment řetězce DNA infekčního činidla.

Základem reakce je možnost za umělých podmínek (in vitro) vytvořit syntézu molekul nukleové kyseliny infekčního agens.

Co je potřeba pro PCR?

  1. Primery jsou segmenty DNA, ze kterých začíná biosyntéza nebo tvorba.
  2. Nukleotidy nebo komplexní sloučeniny, které jsou základem molekuly DNA nebo RNA.
  3. Polymerázová řetězová reakce není možná bez přítomnosti polymerázy, což je enzym urychlující PCR.

Fáze diagnostiky PCR

Jak probíhá molekulární diagnostika pomocí PCR? Postup je jednoduchý a trvá krátkou dobu s ohledem na sběr materiálu.

  1. Před zahájením studie si vezmou potřebný biologický materiál - to je voda z průdušek, krev, obsah žaludku, sputum. Typ biologického materiálu závisí na podezřelém patogenu.
  2. Denaturace nebo zničení primární struktury DNA, která se skládá ze dvou řetězců. Podstatou této fáze je oddělení dvou řetězců pod vlivem vysoké teploty (maximum je 98 ° C, které trvá ne déle než dvě minuty).
  3. V dalším stadiu PCR, zvaném annealing, se teplota sníží o několik stupňů, takže se primer naváže na DNA řetězec.
  4. Prodloužení, během kterého probíhá syntéza požadovaných molekul přímo.

Výsledkem je, že pouze 25–30 takových cyklů obdrží potřebný počet kopií DNA mikroorganismu, které lze snadno rozpoznat.

Vyžaduje PCR diagnózu tuberkulózy?

Není možné, aby všichni lidé s podezřením na tuberkulózu prováděli PCR, protože tento způsob vyžaduje drahé vybavení. Ne všechny veřejné kliniky si to mohou dovolit koupit. Navíc se tak stalo, že obvyklé metody diagnostiky infekce ve většině případů se také ospravedlňují.

Patří mezi ně:

  • průzkum pacientů, historie;
  • úplné vyšetření osoby;
  • studie s použitím tuberkulinového testu Mantoux;
  • radiografie nebo fluorografie;
  • počítačová diagnostika v případě potřeby;
  • metody mikrobiologického výzkumu: mikroskopická analýza a bakteriologické vyšetření sputa.

PCR pro tuberkulózu se provádí ve zvláštních případech, kdy je obtížné stanovit diagnózu nebo není možné provádět jiné instrumentální metody.

I přes hojnost diagnostických metod stále roste výskyt tuberkulózy. V současné době nejde jen o jeho růst, ale i další funkce:

  • onemocnění se často vyskytuje v těžké formě;
  • počet smrtelných případů se zvyšuje;
  • stále odolnější vůči moderní chemoterapii jsou diagnostikovány formy onemocnění.

Neochota samotných lidí každoročně podstoupit rutinní lékařská vyšetření, odmítnutí očkování vede k šíření tuberkulózy. V takových podmínkách potřebujeme rychlé, informativní a účinné výzkumné metody, které by měly být přístupné dětem i dospělým. Všechny výše uvedené diagnostické metody jsou mnohem horší než PCR.

Výhody diagnostiky tuberkulózy pomocí PCR

Tento výzkum, i když nový, se osvědčil, zejména v kontroverzních případech, kdy není možné provést diagnózu z několika důvodů.

Díky PCR je mnohem snazší detekovat původce tuberkulózy v testovaném materiálu.

Výhody PCR diagnostiky jsou následující.

  1. Jedná se o rychlou analýzu. Malý fragment molekuly DNA může být použit k diagnostice během pouhých několika hodin (asi pět), která se úspěšně používá v nouzových situacích, kdy například před operací je nutné určit, zda je člověk nemocný tuberkulózou.
  2. PCR analýza je povolena v případě, kdy jsou jiné metody nedostupné nebo zakázané (pro detekci plicní tuberkulózy, někdy musíte vzít několik radiografických snímků, což bude velká dávka záření).
  3. Pomocí PCR se vyšetřuje biologické prostředí na přítomnost patogenu. Například můžete provést studii mozkomíšního moku, pokud existuje podezření na tuberkulózní meningitidu.
  4. Povolena PCR diagnostika infekčních onemocnění u dětí, protože metoda je bezpečná.
  5. Umožňuje identifikovat patogen v jakékoli fázi onemocnění.
  6. Vysoká citlivost PCR umožňuje detekci Mycobacterium tuberculosis, i když je v biologickém materiálu pouze několik mikroorganismů.
  7. Je dobré provádět diagnózu recidivy onemocnění.

Přečtená PCR se zdá být téměř dokonalou diagnostickou metodou, která by měla mít podezření na tuberkulózu. Existují však i nevýhody, které je třeba vzít v úvahu.

Nevýhody PCR v diagnostice tuberkulózy

V naší době je taková diagnostika vzácnější než pravidelnost. A pro to je důvod.

  1. Jedná se o nákladnou výzkumnou metodu. Na mnoha klinikách chybí vybavení pro PCR kvůli jeho vysokým nákladům, ale analýza může být stále prováděna v placených laboratořích.
  2. Ihned po ošetření mohou být v lidském těle stále přítomny mrtvé mykobakterie nebo žijící v malých množstvích (výsledek bude pozitivní během diagnostiky PCR), takže metoda bude v této době nespolehlivá, nemá smysl ji provádět.
  3. Výsledkem mutací mykobakterií je neúčinná PCR - nelze syntetizovat normální sekvenci řetězce DNA.
  4. Je nutné zvolit správné prostředí pro studii, krev je odebírána pouze v případě, že je podezřelá z infekce (sepse), není třeba brát sputum, pokud existuje otázka tuberkulózy orgánů nervového systému. V tomto případě nebude PCR schopna detekovat patogen a diagnóza bude neinformativní.

Indikace pro detekci tuberkulózy pomocí PCR analýzy

PCR diagnostika tuberkulózy se provádí nejčastěji v kontroverzních případech. Kdy lékaři tuto studii doporučují?

  1. Pokud je obtížné provést diagnózu obvyklými dostupnými metodami, byl kontakt s pacientem s tuberkulózou.
  2. V případě, že osoba nemůže být doručena na kliniku, aby podstoupila rutinní rutinní testy na tuberkulózu, je snazší jej vyšetřit pomocí PCR, protože sputum pro test může být dodáno do nádoby a diagnóza je potvrzena během několika hodin.
  3. Pokud má člověk nouzovou operaci a je naléhavé zjistit, zda je nemocný tuberkulózou.
  4. Pokud je to nutné, těhotná žena je také lepší vyšetřit na tuberkulózu pomocí PCR, protože metoda je bezpečná.
  5. Každý, kdo nebyl diagnostikován tuberkulózou, byl na základě placení potvrzen bakteriologickými metodami a fluoroskopií. To se děje, když je léze v plicích nepostřehnutelná v přímém obraze, a osoba, která během studie dodala sputum, nemohla dodržovat doporučení pro správný sběr materiálu. V tomto případě se člověk obává všech příznaků charakteristických pro plicní tuberkulózu.
  6. Když existují pochybnosti o výsledcích testu Mantoux.
  7. Je vhodnější provést PCR diagnostiku tuberkulózy u dětí. Tento postup je bezpečný, nevytváří další ozáření a je účinný při detekci obtížně diagnostikovatelných forem onemocnění.

Včasná diagnóza tuberkulózy je klíčem k řádně předepsané léčbě a snížení šíření nemoci. Často známé metody detekce onemocnění nejsou vždy účinné. Proto je dnes PCR jednou z nejspolehlivějších a nejbezpečnějších způsobů detekce infekce v raných fázích jejího vývoje.

PCR analýza

PCR (polymerázová řetězová reakce) je zdaleka nejrychlejší a nejspolehlivější metodou diagnostiky infekčních onemocnění.

Princip metody polymerázové řetězové reakce vyvinul Kary Mullis v roce 1983. K jeho objevu získal K. Mullis v roce 1993 Nobelovu cenu za chemii.

Metoda PCR umožňuje dosáhnout významného zvýšení malých koncentrací některých fragmentů nukleové kyseliny (DNA) v biologickém materiálu (vzorek). Metoda je založena na vícenásobném selektivním kopírování (amplifikaci) určitého úseku DNA za použití enzymů za umělých podmínek.

Výhody diagnostické metody PCR jako diagnostické metody pro infekční onemocnění

Přímá detekce patogenů

Mnoho tradičních diagnostických metod, jako je enzymová imunoanalýza, detekuje proteinové markery, které jsou produkty vitální aktivity infekčních agens, což poskytuje pouze nepřímý důkaz přítomnosti infekce. Identifikace specifické oblasti DNA patogenu metodou PCR poskytuje přímou indikaci přítomnosti patogenu.

Vysoká specificita

Vysoká specifičnost metody PCR je způsobena skutečností, že ve studovaném materiálu je detekován unikátní fragment DNA. Specifičnost je určena nukleotidovou sekvencí primerů, což vylučuje možnost získání falešných výsledků, na rozdíl od imunologických metod analýzy, kde jsou chyby v souvislosti se zkříženě reagujícími antigeny časté.

Vysoká citlivost

Metoda PCR umožňuje detekovat i jednotlivé buňky bakterií nebo virů. PCR analýza odhalila přítomnost patogenů infekčních nemocí v případech, kdy to nemohou udělat jiné metody (imunologické, bakteriologické, mikroskopické). Citlivost PCR analýzy je 10-100 buněk na vzorek (citlivost imunologických a mikroskopických testů je 103-105 buněk).

Univerzálnost postupu pro detekci různých patogenů

Materiál pro studium pomocí PCR je DNA patogenu. Metoda je založena na detekci DNA fragmentu nebo RNA, která je specifická pro konkrétní organismus. Podobnost chemického složení všech nukleových kyselin umožňuje využití jednotných metod laboratorního výzkumu. To umožňuje diagnostikovat několik patogenů z jednoho biotestu.

Výsledkem je vysoká rychlost analýzy

Pro PCR analýzu není nutná izolace a kultivace kultury patogenu, což trvá mnoho času. Jednotný způsob zpracování biomateriálu a detekce reakčních produktů a automatizace amplifikačního procesu umožňují provést kompletní analýzu za 4-5 hodin.

Schopnost diagnostikovat nejen akutní, ale i latentní infekce

Metoda PCR je zvláště účinná pro diagnostiku obtížně kultivovatelných, nekultivovaných a perzistentních forem mikroorganismů, se kterými se často setkáváme při latentních a chronických infekcích, protože tato metoda se vyhne potížím spojeným s pěstováním těchto mikroorganismů v laboratoři. Použití PCR diagnostiky je také velmi účinné proti patogenům s vysokou antigenní variabilitou a intracelulárními parazity.

Jak účinné je vyšetření na tuberkulózu sputem pomocí PCR?

Pro identifikaci Kochových tyčinek u lidí se používají různé diagnostické metody. Díky němu lze patologii detekovat i v počáteční fázi, což zvyšuje šance pacienta na zotavení. Analýza sputum pro tuberkulózu je technika, která je nejvíce ceněna a je poměrně účinná. Co to je a kolik stojí taková analýza?

Jaká je analýza sputa pomocí PCR?

PCR znamená polymerázovou řetězovou reakci. Tato metoda je účinná proti infekčním onemocněním. Chcete-li stanovit jasnou diagnózu, nemusíte sbírat velké množství biomateriálu a čekat dlouho, jako v případě setí sputa.

Metoda je založena na získání DNA mikroorganismů. Dále molekulárně genetický výzkum určí, jaký typ mikroorganismů by měl obsahovat dostupný materiál. V podmínkách testovacích zkumavek odborník syntetizuje molekuly bakterií a učiní příslušné závěry během několika hodin.

Účinnost

Analýza sputa pro Mycobacterium tuberculosis je účinná, když Kochova hůlka zasáhla dýchací systém. V tomto případě lze nemoc snadno identifikovat, a to iv prvních hodinách infekce.

Analýza sputem však neprokáže spolehlivý výsledek, pokud je přítomna tuberkulóza:

  • kosti;
  • mozek, mícha;
  • nervový systém;
  • spoje atd.

Fiatriatr bude schopen určit typ onemocnění s přihlédnutím k současným symptomům a spoléhat se na výsledky obecných a dalších analýz.

Je také nevhodné pro takový způsob výzkumu v případě, kdy potřebujete provést kontrolní analýzu po terapeutické léčbě onemocnění. Výsledek bude pozitivní, stejně jako v těle, v každém případě stále existuje živá nebo mrtvá IBC. Je lepší dát přednost dalšímu diagnostickému postupu.

Kontraindikace metody

Neexistují tedy žádné kontraindikace pro testování tuberkulózy sputem pomocí PCR. Existují omezení. Jak je uvedeno výše, není nutné jej provádět po léčbě tuberkulózy. Výsledky nebudou užitečné. Zde je žádoucí uchýlit se k jiné diagnóze.

Kromě toho pro tuto diagnózu neexistují žádné další překážky. Sputum může být vyšetřeno ve všech věkových kategoriích a všech souvisejících onemocněních. I když není hojné uvolňování sputa, analýza může být provedena odebráním hlenu pomocí bronchoskopie.

Výhody

V této metodě, množství plusy, tito zahrnují: t

  1. Vysoká specificita a citlivost. Je detekován pouze původce tuberkulózy. Neexistuje žádná falešná odpověď, pokud budou vzaty v úvahu všechny nuance postupu. Mykobakterie jsou detekovány i při jejich minimálním počtu. I když je v odebraném materiálu 10 abnormálních buněk, infekce bude detekována.
  2. Rychlost získání odpovědi. Jak moc se provádí analýza? Po 3-5 hodinách můžete získat výsledek. Není třeba dělat kultivaci sputa pro tuberkulózu, což zkracuje čas.
  3. Můžete se identifikovat jako skrytá infekce a ta, která je v akutní formě.
  4. Neexistují žádné absolutní kontraindikace. To umožňuje provádět postup pro všechny bez výjimky (i pro malé děti), a to zejména v případech, kdy nejsou vyřešeny jiné metody.
  5. Pomocí PCR diagnostiky jsou studovány různé biomateriály (moč, výkaly, krev, sliny, mozkomíšní mok atd.).
  6. Metoda odhaluje tuberkulózu v raných stadiích, v prvních hodinách po infekci.
na obsah ↑

Nevýhody

Kromě pozitivních stránek existují i ​​negativní. To je:

  1. PCR analýza je drahá „radost“. V každém zdravotnickém středisku není navíc k dispozici vybavení nezbytné pro jeho realizaci. V klinikách je to zřídka přítomné, protože jeho hodnota je také skvělá. Pokud mluvíme o soukromých klinikách, pak ano, můžete najít tento druh diagnózy. Nechte se, bohužel, ne každý.
  2. To ukazuje falešně pozitivní výsledek u těch lidí, kteří nedávno podstoupili léčbu tuberkulózy.
  3. Pokud je MBC mutován, může metoda také poskytnout falešné výsledky.
  4. Pokud je materiál sbírán nesprávně, nebo odborník, který provádí výzkum, nemá dostatečnou kvalifikační úroveň, je možná i porucha. V některých případech bude nutné postup opakovat několikrát a pokaždé, když se platba opakuje.
na obsah ↑

Příprava na analýzu

Aby materiál měl vysokou kvalitu, musí být správně smontován a musí být na něj řádně připraven.

Existují určitá pravidla pro sběr sputa pro tuberkulózu. Akční algoritmus je následující:

  1. I v předvečer, ve večerních hodinách člověk potřebuje pít vykašlávání (pokud se sputum pohybuje špatně). I když to nepomohlo, inhalace by měla být prováděna na základě léčivého ředicího a vykašlávacího léku. V nepřítomnosti sputa je pacient zaměřen na bronchoskopii. Během tohoto postupu je materiál pro studii odebrán.
  2. Předem si zakupte speciální kontejner. Je sterilní a vzduchotěsný, takže tam není možné nic navíc, stejně jako předem otevřené.
  3. Místnost, kde bude sputum shromažďováno, by měla být dobře větraná. Je nutné otevřít okna, dveře, zapnout kapotu. Další dobrou volbou je dostat čerstvý vzduch (například na balkon nebo do dvora).
  4. Bezprostředně před zákrokem musíte všechny varovat, aby nikdo nevstoupil do místnosti, kde se všechno stane. V biomateriálu by neměly být žádné další mikročástice - to je důležité.
  5. Nedoporučujeme jíst před vychystáváním.
  6. Oplach úst a hrdla.
  7. Slin se vylévá ven. Jeho kapacita by měla klesnout na minimum.
  8. Při kašlání člověk vyndá flegma a vyplivne ho do připravené nádoby. Po zákroku pevně uzavřete víko a vzorek odeberte do laboratoře.

Jak sbírat sputum by měl informovat lékaře. Pokud se pacient neodváží udělat to na vlastní pěst, pak zdravotníci přijdou na záchranu. Během manipulace si nasadili speciální ochrannou masku. Sbírat sputum bude ve speciální místnosti, kde pro cizince neexistuje žádný způsob. Pokud pacient nemůže přijít na kliniku, přijde specialista do svého domu a pomůže sbírat hlen.

Pokud se provede bronchoskopie, pacient se injikuje do průdušnice přístrojem - bronchoskopem. S jeho pomocí je materiál odebrán.

Pro spolehlivost je vhodné provést analýzu třikrát, a to:

  • ráno nalačno;
  • poprvé po 4-5 hodinách;
  • 24 hodin po první studii a také před jídlem.
na obsah ↑

Jak se tato analýza provádí?

Absolvování testu na tuberkulózu je pouze součástí práce. Hlavní dopředu. Hodně záleží na tom, jak se připravil specialista.

Průběh studie je následující:

  1. Specialista postupuje ke zničení primární struktury DNA (denaturace). Jsou zde dva řetězce. Při vysokých teplotách se oddělují.
  2. V dalším stupni se teplota sníží (žíhá). To je nezbytné pro spojení řetězce DNA s primerem.
  3. Třetí etapou je prodloužení. Zde jsou syntetizovány potřebné molekuly.
na obsah ↑

Výsledky dekódování

Mycobacterium tuberculosis ve sputu pomocí PCR lze detekovat či nikoliv. Pozitivní výsledek je založen na skutečnosti, že v biomateriálu se nachází DNA Koch. To naznačuje, že osoba je infikována. S negativní - 98% skutečnosti, že subjekt není infikován.

Ukazatele lze posuzovat podle:

  • jaká fáze patologie (latentní nebo aktivní);
  • jak moc je tělo postiženo;
  • zda je zvolená léčba účinná v konkrétním případě.

Mějte na paměti, že nic není důkladné. Proto může být falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledek. Pro zajištění její správnosti se doporučují další diagnostické postupy nebo dvakrát (třikrát).

Analýza nákladů v různých centrech

Na různých klinikách můžete dávat sputum pro PCR. Dovolte nám uvést příklady několika populárních moskevských center s cenovou politikou.

Metody testování sputa pro tuberkulózu

Analýza sputum pro tuberkulózu je zahrnuta v souboru diagnostických opatření nezbytných k identifikaci a objasnění diagnózy. Obsah sputa pomůže vytvořit kompetentní léčebný režim.

Jak projít testem na sputum na tuberkulózu

Lékaři vyvinuli pravidla pro provádění analýzy. Sliny se sbírají v dopoledních hodinách před tím, než osoba měla snídaně. Nejprve pacient provede hygienické procedury:

  • Čištění zubní skloviny;
  • důkladné opláchnutí čistou vodou ústní dutiny a hltanu.

Poté začíná okamžité dodání materiálu pro analýzu. Jak projít testem sputa? Požadavky na postup:

  1. Příprava začíná předem, večer. Pacientovi se doporučuje, aby užíval speciální léky, které učiní plicní sekreci přirozenější. Jedná se o vykašlávání a ředění sloučenin. Pokud takové postupy nepomohou, proveďte inhalaci farmaceutickou kompozicí pro vykašlávání.
  2. Připravte nádoby na sputum. Mucus musí být sbírán do sterilizovaných nádob, těsně uzavřen, pevně uzavřen.
  3. Před porodem vykašlete a vyplivněte do nádoby. Objem slin by neměl být velký, vyžaduje si sputum z hrtanu. Bakterie ústní dutiny jsou v analýze cizí.
  4. Sliny sbírejte v místnosti s vynikající ventilací. Analýza se provádí otevřením příčníku a spuštěním odsavače par. Doporučuje se otevřít okna, nebo jít ven na čerstvý vzduch.

Během procedury v místnosti je zakázáno vstupovat. Outsiders mohou přispět k mikroflóře kanceláře, a tak k sputum, patologickým formacím. Zdravotníci obdrží analýzu ve speciální masce (respirátor).

Analýza sputum transkriptu tuberkulózy

Dekódování začíná pohledem na vzhled hlenu. Patologie charakterizuje změnu barvy - ztmavne, s viditelnými příměsemi krve. Barva není hlavním indikátorem. Sputum ztmavne od pití červeného vína, vášeň kávy. Některé léky a barevné nápoje mění vzhled hlenu.

Shromážděný materiál je dešifrován dvěma ukazateli, to znamená, že lékaři mají dva výsledky:

Pozitivní odpověď

Analýza výsledného sputa potvrzuje přítomnost onemocnění v těle. Co to potvrzuje:

  • cizí látky nebo neznámé inkluze;
  • přítomnost sliznic hlenu;
  • viditelné pruhy;
  • nepříjemný hnisavý nebo infekční zápach;
  • hnis.

Metoda makroskopického výzkumu poskytuje další údaje:

  • fibrinové vazby;
  • Kochové formace čoček;
  • produkty z rozkladného rozkladu bakteriálních látek;
  • zbytky patologického procesu v plicní tkáni.

Pozitivní výsledek ukazuje zvýšené množství proteinových sloučenin. Dosahuje 100-120 g / l.

Další mikroskopická metoda umožňuje identifikovat další nebezpečné prvky:

  • alveolární makrofágy;
  • nadhodnocené složení leukocytů;
  • vysoká míra lymfocytů.

Pro tuberkulózu se člověk často plivne z úst. Hemoptýza zvyšuje tvorbu červených krvinek. Objem slin v ústech je takový, že ho člověk nemůže polknout, aniž by si toho všiml. Je to více než ve zdravém stavu.

Negativní odpověď

Studie ukazuje, že počet leukocytů je malý, odpovídá normě. Mikrobakterie také nejsou detekovány. Pokud pacient není zdravý, odborník předepíše další vyšetření. Je možné, že onemocnění souvisí s plicním onemocněním. Typy a metody další diagnostiky závisí na symptomech a stavu pacienta.

Jak se studuje hlen

Tuberkulóza je nebezpečným patologickým účinkem na plicní tkáň, je pozorována jejich dezintegrace. Analýza se provádí několika metodami. Nejběžnější - ELISA (imunotest). Podstata metody:

  1. Protilátky jsou přidány do roztoku, ve kterém je umístěna část sputa.
  2. Zkontrolujte koncentraci antigenů ve srovnání s normou zdravého těla.
  3. Určete aktivitu patologického prostředí.
  4. Diagnostikujte.

Druhou verzí laboratorního výzkumu jsou ODPADY. Pro tuto metodu vezměte speciální zdravotnické vybavení. Podstata výzkumu hardwaru:

  1. V sputu byl mikroprostředí vstřikován pro zamýšlený typ infekce.
  2. Přístroj začne růst u určitých teplotních kmenů bakterií.
  3. Oxid uhličitý je produkován v procesu, a senzory vyzvednout.
  4. Plyn se kombinuje s barvivem.
  5. Na fluorescenčním indexu vyvozte závěry o typu onemocnění.

Nejjednodušší způsob je kulturní. Hleny zasety ve speciálním prostředí. Lékař zkoumá typy kolonií mikrobiálních útvarů. Metoda je nejdelší, ale umožňuje prokázat diagnózu. Používá se velmi zřídka, přesně z důvodu dlouhého časového období, které není vždy vhodné pro pacienta.

Analýza pcr sputa pro tuberkulózu

PCR je zkratka pro lékařský termín polymerázová řetězová reakce. Diagnostika je jedním z nejnovějších vědců. To bylo otevřeno v roce 1983, význam objevu je oceňován na světě, vědec získal nejvyšší uznání - Nobelova cena.

Metoda je založena na použití genetického inženýrství. Jeho všestrannost v potřebě malého množství materiálu pro přesnou diagnózu. Identifikace infekce tuberkulózou je opravdu v prvních hodinách infekce, bez čekání na vývoj onemocnění.

Podstata metody, kterou je polymeráza:

  • pacient vezme fragment DNA částic;
  • provádět biologickou syntézu materiálu;
  • určeno třídou mikroorganismů.

Tento proces je technologicky složitý, zahrnuje molekulárně genetické vyšetření. PCR na tuberkulózu trvá doslova několik hodin. Doba potřebná pro jiné metody nemůže být porovnána s ním v rychlosti. Po absolvování analýzy pacient čeká na detekci původce. Proces, který je základem pouze odborníka, může pochopit. Běžný člověk nerozumí složitosti metody.

Jak je diagnostikována tuberkulóza:

  1. Vezměte potřebný materiál pro analýzu. Co by to mohlo být: krev, žaludek, sputum, voda, umyté průduškami.
  2. Typ materiálu se volí v závislosti na typu infekce možného patogenu.
  3. Dalším krokem je studium řetězového spojení. Dva řetězy jsou vystaveny vysokým teplotám až 98 stupňů. Stádium se nazývá denaturace (destrukce strukturního řetězce DNA). Doba expozice - až 2 minuty.
  4. Další fází je žíhání. Teplota se sníží, primer se nechá navázat na řetězec DNA.
  5. V důsledku toho dochází k prodloužení - syntéze molekul nezbytných pro tento proces.

Pro takovou analýzu je vyžadováno speciální vybavení. Je to drahé, takže není k dispozici v žádném zdravotnickém zařízení. PCR se provádí v obtížných případech, kdy neexistuje přesný výsledek konvenčních diagnostických metod, není možné provádět instrumentální metody kontroly stavu pacienta.

Výhody technologie PCR:

  1. Rychlost dosažení výsledku. Přibližně 5 hodin má lékař přesné údaje. Tato rychlost vám umožní pomoci pacientovi v případě nouze. Častěji se jedná o předoperační období.
  2. Povoleno, pokud nelze použít jiné metody. Například časté opakování rentgenových paprsků vede k záření. PCR není pro pacienta nebezpečná.
  3. Můžete zkoumat jakékoliv biologické prostředí. Jsou identifikovány i komplexní formy tuberkulózy.
  4. Metoda je tedy bezpečná pro děti.
  5. Infekce je detekována v každém stadiu.
  6. PCR neumožňuje skrýt ani malý počet bakteriálních mikroformací.
  7. Vhodné pro kontrolu možného opakovaného výskytu tuberkulózy.

Kolik analýzy sputum pro tuberkulózu

Vzorky se odebírají více než jednou. Opakování vylučuje možnost chyb nebo získání nekvalitního materiálu, který neodráží skutečnou polohu a stav pacienta. Kolikrát sbírat sputum, řekněte ošetřujícímu lékaři. Nejlepší volba je třikrát denně. Někdy mohou být vyžadovány další vzorky. Během které doby shromažďují:

  1. Před jídlem ráno.
  2. 3-4 hodiny po prvním testu.
  3. Druhý den, také před jídlem.

Tuberkulóza je nebezpečné onemocnění, které může ovlivnit tělo jakékoli osoby. Existuje mnoho situací infekce. Při jakémkoliv podezření na možnost infekce nečekejte na jasné příznaky. Měla by být testována, vyšetřena a včas zahájena léčba.

PCR diagnostika tuberkulózy u dětí a dospělých: indikace pro

Světová zdravotnická organizace uznala před 20 lety, že míra šíření tuberkulózy byla mimo kontrolu a dosáhla rozsahu epidemie. Od té doby se situace nezlepšila. Každý rok je diagnostikováno více než milion případů onemocnění, z nichž téměř čtvrtina je smrtelných. V posledním desetiletí se incidence u dětí zvýšila, většina forem nemoci není vhodná pro standardní léčbu antibiotiky.

Dnes je jedním z globálních úkolů v medicíně vývoj takových diagnostických metod, které umožní identifikovat patologii před nástupem výrazných klinických příznaků. Jedním z nich je polymerázová řetězová reakce (PCR) pro tuberkulózu, která pomáhá detekovat tyčinky způsobující Kochovu chorobu v krvi, sputu a dalších biologických tekutinách.

Diagnóza tuberkulózy

Screeningové testy jsou zaměřeny na detekci pacientů, nosičů tuberkulózy a prevenci šíření infekce ve společnosti. Pro děti mladší 14 let se masivně používá test Mantoux. Jde o imunologický test, při němž se dávka tuberkulínu podkoží injektuje - což je komplexní směs genetického materiálu několika typů mykobakterií. Výskyt výrazné reakce indikuje aktivně se vyskytující infekční proces.

Pro preventivní vyšetření u dospělých s použitím fluorografie nebo rentgenového záření. Tyto metody pomáhají zviditelnit patologické léze v plicní tkáni. Způsobuje však obtíže při diferenciaci tuberkulózy od jiné organické patologie (maligní a benigní neoplazmy, zánětlivé procesy, parazitární invaze, profesionální poškození plic).

Pro objasnění struktury a velikosti patologického zaměření mohou být zapotřebí další instrumentální studie:

  • cílená radiografie;
  • počítačová tomografie;
  • zobrazování magnetickou rezonancí.

Metody diagnostiky tuberkulózy

V případě pochybných výsledků a při stanovení adekvátní terapie je zapotřebí přesnějších diagnostických metod, které umožní izolovat patogen. Mikroskopické a bakteriologické vyšetření sputa se používá k dlouhodobému potvrzení plicních forem tuberkulózy.

V posledních letech je výskyt mykobakterií různých orgánů a systémů - ledvin, kostí, střev, kůže - stále častější. K identifikaci těchto forem tuberkulózy, ultrazvukového vyšetření, kultury moči a stolice lze použít endoskopické vyšetření.

PCR diagnostika tuberkulózy pomůže potvrdit přítomnost Kochových tyčinek v krvi, stejně jako její citlivost na určité léky. Jedná se o vysoce účinnou metodu založenou na detekci bakteriálního genetického materiálu v různých biologických tekutinách.

Specifičnost a indikace

Polymerázová řetězová reakce je vysoce citlivá mikrobiologická diagnostická metoda založená na principech genetického inženýrství. Pro potvrzení přítomnosti patogenu v biologickém materiálu je postačující pro tento fragment detekovat jedinečný fragment nukleové kyseliny. PCR pro tuberkulózu může detekovat bakterie v krvi, sputu, moči.

V současné době vyvinula několik metod analýzy. Mezi nejoblíbenější patří:

  • PCR v reálném čase;
  • mikrofluidní technologie;
  • sekvenování a pyrosekvenování.

PCR v reálném čase

Laboratoře nejčastěji využívají polymerázovou řetězovou reakci v reálném čase, protože snižuje počet falešně pozitivních výsledků a samotný proces analýzy trvá krátkou dobu.

Vzhledem k velkému počtu skrytých forem onemocnění a neúčinnosti standardních diagnostických metod se stále více používá PCR. Účel této analýzy je uveden na adrese:

  • identifikaci podezřelých oblastí na rentgenovém snímku;
  • pochybné výsledky tuberkulinového testu;
  • nemožnost provádět mikroskopickou a bakteriologickou analýzu sputa u osob ve vážném stavu;
  • provádění chirurgických zákroků, pokud je nutné rychle zajistit, že nedochází k infekci;
  • nepřípustnost použití fluorografie, rentgenového záření nebo počítačové tomografie (například u těhotných žen a kojení v případech nadměrného ozáření);
  • podezření na extrapulmonální tuberkulózu (doporučuje se použít nejen krev, ale i hlen).

PCR diagnostika tuberkulózy se osvědčila při vyšetření dětí z důvodu nedostatku dodatečné expozice a rychlých výsledků.

Postup přípravy a analýzy

Není nutná speciální příprava na krevní PCR. Aby se však předešlo komplikacím odběru vzorků krve a aby se získal kvalitní materiál, je třeba dodržovat následující obecná pravidla:

  • analýza by měla být provedena ráno ne dříve než 2 hodiny po probuzení;
  • Mělo by omezit příjem mastných a smažených potravin denně před odběrem krve;
  • zdržujte se jídla, čaje a kávy po dobu 8-9 hodin, je dovoleno pít čistou vodu;
  • Nekuřte nejméně 3-4 hodiny.

V případě trvalého léčení (hormony, antikoagulancia, protizánětlivá léčiva, antibiotika, ředidla krve) byste o tom měli informovat asistenta laboratoře.

Při aplikaci sputa byste měli dobře čistit zuby a několikrát si vypláchnout ústa. Materiál odeberte ve sterilní nádobě. Pro dosažení lepších výsledků lze večer použít expektoranci nebo mukolytikum.

Diagnóza se skládá z několika fází.

    Plotový materiál. Lze jej provádět v laboratoři i na dálku. Některé typy materiálu, které pacient sbírá nezávisle (moč, hlen).

Zničení struktury nukleových kyselin (denaturace molekul DNA a RNA). K tomu se testovaný materiál zahřívá na teplotu 98 ° C a udržuje se několik minut. Výsledkem je, že se dvojitá šroubovice uvolní, vytvoří se jednovláknové molekuly.

  • Žíhání Po přidání primeru (krátký úsek nukleové kyseliny) teplota klesne o několik stupňů, aktivuje se polymeráza.
  • Elogace. Teplota je nastavena na optimální úroveň, enzymová aktivita dosahuje maxima a druhý řetězec je dokončen v souladu s Chargaffovým pravidlem komplementarity.
  • Pro dokončení studie je nezbytné syntetizovat požadovaný počet molekul DNA - asi 50 cyklů výše uvedené reakce. To trvá asi 2-3 hodiny. Pozitivní výsledek reakce neznamená vždy aktivní stadium onemocnění, ale je indikátorem přítomnosti mikroorganismu v těle.

    Výhody a nevýhody metody

    Ve srovnání s jinými mikrobiologickými metodami, PCR nepotrvá dlouho, než detekuje Mycobacterium tuberculosis pomocí PCR, výsledek lze získat v den testování.

    Další výhodou je vysoká specifičnost analýzy, která umožňuje detekci přítomnosti patogenu s přesností 90-95% v téměř každém biomateriálu (krev, moč, výkaly, mozkomíšní mok, sputum, návaly průdušek).

    Existuje však několik nevýhod metody:

    • poměrně vysoké procento falešně pozitivních výsledků (až 15%), což je spojeno s detekcí neživých mikroorganismů;
    • v některých případech můžete tuto skutečnost vynechat, protože Mycobacterium tuberculosis je často vystavena mutacím a změnám genetického materiálu;
    • nízká účinnost při vyšetření osob s imunodeficiencí;
    • vysoké náklady na výzkum, potřeba drahých zařízení a činidel.

    Co lze vyměnit?

    Vzhledem k rozmanitosti forem infekce tuberkulózy je pro přesnější diagnózu a volbu léčby nutné kombinovat několik diagnostických studií:

      Povinná analýza pro děti je Mantoux test. Pokud se zavedení tuberkulínu (genetický materiál mykobakterií) projeví výraznou reakcí, lze předpokládat infekci tuberkulózním bacilem.

    Pro vizualizaci patologického fokusu lze použít rentgenové metody. V diagnostice extrapulmonální tuberkulózy se používají endoskopické metody při současné biopsii:

    • bronchoskopie pomáhá identifikovat léze hrtanu, průdušnice, průdušek;
    • kolonoskopie - střeva;
    • cystouretroskopie - orgány močového systému;
    • hysteroskopie - ženské genitálie. Tyto metody nejsou specifické, pro stanovení přesné diagnózy by měl být identifikován patogen.

    Obecné klinické testy pomohou specifičtěji určit stav těla. Vyžaduje se kompletní krevní obraz s leukocytárním vzorcem.

    Zvýšení počtu neutrofilů se sníženou hladinou lymfocytů a zvýšení rychlosti sedimentace erytrocytů (ESR) indikuje aktivní zánětlivý proces bakteriální etiologie. Vyloučit poškození orgánů močového systému pomocí obecné analýzy moči a kultury pro sterilitu.

    PCR je v současné době dostupná ve většině soukromých laboratoří. To vyžaduje nejen vysoce kvalifikované odborníky, ale také drahé vybavení, velký počet činidel. Použití této metody je proto i přes vysokou přesnost a specifičnost omezené.

    Výhody a nevýhody PCR (a) pro diagnostiku tuberkulózy

    Specifická infekce tuberkulózy byla přítomna v lidských tkáních a strukturách po mnoho let a za určitých okolností se rychle šíří po celém těle za 2-3 měsíce. Někdy je nejvhodnější zvolit nejlepší léčbu z důvodu pozdní diagnózy a adaptace patogenu na mnoho léčiv.

    Poslední PCR diagnostika tuberkulózy pomáhá odhalit nejenom vzniklé onemocnění, ale i samotný patogen, když se dosud neobjevily první známky onemocnění.

    Co je to PCR?

    Nedávno se objevila diagnostika tuberkulózy pomocí PCR. V roce 1983, mikrobiolog z Ameriky, Cary Mullis, vynalezl postup, kterým by mikroorganismy mohly být rekonstruovány z biologického materiálu v krátkém segmentu. Tato práce získala Nobelovu cenu.

    PCR pro tuberkulózu je proces polymerního řetězce, ve kterém je diagnostika a detekce virových patogenů genetickým inženýrstvím. Tato technika se používá v imunologických, mikrobiologických, virologických a biochemických laboratořích.

    Univerzální metoda pomáhá lékařům diagnostikovat a identifikovat infekční proces i po prvních hodinách infekce, dlouho před nástupem příznaků. Výzkum je možný i s malým množstvím biomateriálu.

    Co je potřeba pro analýzu?

    • Několik segmentů DNA (primery), se kterými začíná biologická syntéza;
    • Nukleotidové sloučeniny, základ molekuly DNA nebo RNA;
    • Enzym polymerázy, který urychluje PCR analýzu.

    Jaký je základ metody?

    Za prvé, segment DNA je extrahován z biomateriálu z infikované osoby za použití metod genově-molekulární biosyntézy, dále je určen typ mikroorganismů, ke kterým biofragment patří.

    Tato složitá reakce trvá méně času než některé biometody. PCR určuje patogen za několik hodin, zatímco není třeba jej izolovat od biologické tekutiny (sputum, cerebrospinál nebo krevní médium), není nutné ji dlouho pěstovat na živném médiu. Stačí, když studovaný materiál obsahuje DNA vlákno infekčního patogenu.

    Při provádění PCR krevního testu na tuberkulózu in vitro je uměle vytvořena syntéza ribonukleových kyselin mycobacterium tuberculosis.

    Fáze diagnostiky

    Molekulární reakce pomocí PCR je jednoduchý postup, který trvá málo času. Vybere se požadovaný biomateriál: krev, sputum, promývací kapalina pro průdušky se použijí ke stanovení tbc.

    1. Za prvé, primární forma DNA je zničena, 2 řetězce jsou odděleny při vysoké teplotě (maximálně 98 ° C po dobu ne delší než 2 minuty);
    2. Pak se provede žíhání, primární teplota se sníží několika děleními, řetězec DNA se naváže na primer;
    3. Další stupeň se nazývá elongace s biosyntézou nezbytných molekulárních struktur.

    Pro získání požadovaného počtu kopií DNA musí projít 25 až 30 takových cyklů a výsledný počet mykobakterií je snadno rozpoznatelný.

    Je nutné provést PCR pro tuberkulózu?

    Přímo všem pacientům s podezřením na TVC se nedělá diagnostika řetězce, protože postup vyžaduje použití drahého vybavení. Ne všechny zdravotnické instituce umožňují jeho nákup, zejména proto, že obvyklé metody diagnostiky mycobacterium tuberculosis jsou také informativní.

    • Pečlivá anamnéza, dotazování pacienta;
    • Externí zkouška;
    • Tuberkulinový test Mantoux;
    • Radiografické nebo fluorografické vyšetření;
    • V případě potřeby počítačová diagnostika;
    • Mikroskopické nebo bakteriologické vyšetření masky pomocí sputa.

    PCR pro tuberkulózu se provádí pouze tehdy, když není možné provést jinou instrumentální analýzu nebo za okolností, které je obtížné diagnostikovat.

    Přestože bylo vynalezeno velké množství diagnostických metod, stále roste počet pacientů s tuberkulózou. Navíc incidence získala některé rysy: často je pozorována závažná forma onemocnění, zvyšuje se počet úmrtí, patogen se stává rezistentním vůči existujícím chemoterapeutikům.

    Mnoho lidí nechce každoročně podstoupit rutinní inspekci, odmítnout očkování, což vede ke zvýšení incidence. Tyto okolnosti vyžadují účinné a informativní výzkumné metody dostupné pro dospělé a děti diagnostikované tbc. PCR má výhody oproti jiným diagnostickým metodám.

    Jaká je hodnota metody?

    Tento nejnovější výzkum se osvědčil. Pokud je z mnoha důvodů obtížné stanovit diagnózu nebo v některých sporných případech PCR detekuje tuberkulární bacilus snadněji v biologickém materiálu než jiné metody.

    • Tato rychlá studie, malý segment molekuly umožňuje provést přesnou diagnózu v krátkém čase přibližně za 5 hodin, což se používá v naléhavých případech, například před urgentním chirurgickým zákrokem;
    • Krevní test na tuberkulózu je možný, pokud jsou jiné metody nedostupné nebo kontraindikované - někdy pro detekci patogenu tbc, musí být odebráno mnoho Rg-snímků, přičemž dávka záření je příliš velká;
    • Použitím polymerázové reakce mohou být vyšetřeny biologické tekutiny na přítomnost mykobakterií. Můžete například provést studii mozkomíšního moku s tuberkulózní meningitidou nebo močí s urogenitální tuberkulózou;
    • Metoda je bezpečná, diagnostika tuberkulózy u dětí pomocí PCR nezpůsobuje potíže;
    • Způsob polymerní reakce odhaluje bacil tuberkulózy v jakékoliv formě a stadiu onemocnění;
    • Přítomnost pouze několika bakterií v biomateriálu umožňuje vidět přítomnost mikroorganismů, protože se jedná o citlivou reakci;
    • PCR snadno diagnostikuje opakování onemocnění.

    Navzdory velkému množství výhod se neuskutečňují všichni pacienti s podezřením na studii tbc, protože existují i ​​nevýhody, které jsou také zohledněny.

    Video

    Video - časná diagnostika

    Jaké jsou nevýhody?

    Tato metoda diagnózy je spíše výjimečná než přirozená, proto existují důvody. Nejprve se berou v úvahu vysoké náklady na metodu. Zařízení je drahé, kliniky nemají možnost si ho koupit kvůli vysoké ceně, ale většina placených laboratoří má vybavení, které je analyzováno.

    • Metoda detekuje mrtvé bakterie, které zemřely po léčbě, zatímco PCR vykazuje pozitivní výsledek. Bezprostředně po chemoterapii nemá smysl provádět studii, protože výsledek bude nespolehlivý;
    • Mutace Mycobacterium tuberculosis jsou citlivé, což vede k neefektivnosti metody a řetězec DNA nemůže být syntetizován konzistentně.

    Prostředí pro studii by mělo být pečlivě vybráno, krev nebo moč mohou být odebírány pouze v případě podezření na infekci. Při podezření na kostní tuberkulózu by se nemělo užívat sputum. V této situaci bude diagnóza nesprávná.

    Krev a moč u pacienta s tuberkulózou, který má být studován na PCR, je zřídka užíván, identifikace onemocnění tímto způsobem je sporná. V těchto biologických prostředích je patogen stanoven pouze v sepse nebo v případě diseminované tuberkulózy. Nejčastější jsou lokální formy, jejich krev a moč mohou zůstat nezměněny. Nejčastěji je hlen vyšetřován.

    Kdo ukazuje analýzu?

    Většina pacientů je zaslána na PCR diagnostiku v kontroverzních a obtížných případech tuberkulózy. Kdy zdravotníci vydávají doporučení pro výzkum?

    1. Pokud existuje kontakt s osobou, která byla spolehlivě diagnostikována tuberkulózou, je obtížné ji diagnostikovat běžnými metodami;
    2. Za těchto okolností, pokud pacient poskytne kliniku je nemožné pro radiografii nebo jiný výzkum. V takové situaci je snazší jej zkontrolovat polymerní metodou. Analýza sputum je jednoduše dodána do laboratoře ve speciální nádobě a výsledek je znám po několika hodinách;
    3. Před operací je naléhavě nutné určit, zda je pacient nemocný tuberkulózou, v tomto případě je indikována PCR;
    4. Vzhledem k bezpečnosti metody je možné provést průzkum těhotné ženy nebo dítěte, aniž by vzniklo další rentgenové zatížení;
    5. Pochybné výsledky testu Mantoux.

    Každý, kdo chce, může být vyšetřen za poplatek, pokud tuberkulóza nebyla potvrzena pomocí bakteriologie a fluoroskopie. To se děje, pokud je léze v plicní tkáni v přímém zobrazení neviditelná v Rg-obraze a pacient není schopen správně zachytit sputum, ale známky lidské tuberkulózy jsou narušeny.

    Moderní PCR reakce na diagnózu je klíčem k úspěšné léčbě, v důsledku čehož se prevalence onemocnění snižuje. Tradiční metody identifikace onemocnění nevedou vždy k požadovanému účinku.

    PCR analýza se tak stala jednou ze spolehlivých a bezpečných metod diagnózy v raných stadiích onemocnění.