PCR diagnostika tuberkulózy u dětí a dospělých: indikace pro

Světová zdravotnická organizace uznala před 20 lety, že míra šíření tuberkulózy byla mimo kontrolu a dosáhla rozsahu epidemie. Od té doby se situace nezlepšila. Každý rok je diagnostikováno více než milion případů onemocnění, z nichž téměř čtvrtina je smrtelných. V posledním desetiletí se incidence u dětí zvýšila, většina forem nemoci není vhodná pro standardní léčbu antibiotiky.

Dnes je jedním z globálních úkolů v medicíně vývoj takových diagnostických metod, které umožní identifikovat patologii před nástupem výrazných klinických příznaků. Jedním z nich je polymerázová řetězová reakce (PCR) pro tuberkulózu, která pomáhá detekovat tyčinky způsobující Kochovu chorobu v krvi, sputu a dalších biologických tekutinách.

Diagnóza tuberkulózy

Screeningové testy jsou zaměřeny na detekci pacientů, nosičů tuberkulózy a prevenci šíření infekce ve společnosti. Pro děti mladší 14 let se masivně používá test Mantoux. Jde o imunologický test, při němž se dávka tuberkulínu podkoží injektuje - což je komplexní směs genetického materiálu několika typů mykobakterií. Výskyt výrazné reakce indikuje aktivně se vyskytující infekční proces.

Pro preventivní vyšetření u dospělých s použitím fluorografie nebo rentgenového záření. Tyto metody pomáhají zviditelnit patologické léze v plicní tkáni. Způsobuje však obtíže při diferenciaci tuberkulózy od jiné organické patologie (maligní a benigní neoplazmy, zánětlivé procesy, parazitární invaze, profesionální poškození plic).

Pro objasnění struktury a velikosti patologického zaměření mohou být zapotřebí další instrumentální studie:

cílená radiografie;
počítačová tomografie;
zobrazování magnetickou rezonancí.

Metody diagnostiky tuberkulózy

V případě pochybných výsledků a při stanovení adekvátní terapie je zapotřebí přesnějších diagnostických metod, které umožní izolovat patogen. Mikroskopické a bakteriologické vyšetření sputa se používá k dlouhodobému potvrzení plicních forem tuberkulózy.

V posledních letech je výskyt mykobakterií různých orgánů a systémů - ledvin, kostí, střev, kůže - stále častější. K identifikaci těchto forem tuberkulózy, ultrazvukového vyšetření, kultury moči a stolice lze použít endoskopické vyšetření.

PCR diagnostika tuberkulózy pomůže potvrdit přítomnost Kochových tyčinek v krvi, stejně jako její citlivost na určité léky. Jedná se o vysoce účinnou metodu založenou na detekci bakteriálního genetického materiálu v různých biologických tekutinách.

Specifičnost a indikace

Polymerázová řetězová reakce je vysoce citlivá mikrobiologická diagnostická metoda založená na principech genetického inženýrství. Pro potvrzení přítomnosti patogenu v biologickém materiálu je postačující pro tento fragment detekovat jedinečný fragment nukleové kyseliny. PCR pro tuberkulózu může detekovat bakterie v krvi, sputu, moči.

V současné době vyvinula několik metod analýzy. Mezi nejoblíbenější patří:

PCR v reálném čase;
mikrofluidní technologie;
sekvenování a pyrosekvenování.

PCR v reálném čase

Laboratoře nejčastěji využívají polymerázovou řetězovou reakci v reálném čase, protože snižuje počet falešně pozitivních výsledků a samotný proces analýzy trvá krátkou dobu.

Vzhledem k velkému počtu skrytých forem onemocnění a neúčinnosti standardních diagnostických metod se stále více používá PCR. Účel této analýzy je uveden na adrese:

identifikaci podezřelých oblastí na rentgenovém snímku;
pochybné výsledky tuberkulinového testu;
nemožnost provádět mikroskopickou a bakteriologickou analýzu sputa u osob ve vážném stavu;
provádění chirurgických zákroků, pokud je nutné rychle zajistit, že nedochází k infekci;
nepřípustnost použití fluorografie, rentgenového záření nebo počítačové tomografie (například u těhotných žen a kojení v případech nadměrného ozáření);
podezření na extrapulmonální tuberkulózu (doporučuje se použít nejen krev, ale i hlen).

PCR diagnostika tuberkulózy se osvědčila při vyšetření dětí z důvodu nedostatku dodatečné expozice a rychlých výsledků.

Postup přípravy a analýzy

Není nutná speciální příprava na krevní PCR. Aby se však předešlo komplikacím odběru vzorků krve a aby se získal kvalitní materiál, je třeba dodržovat následující obecná pravidla:

analýza by měla být provedena ráno ne dříve než 2 hodiny po probuzení;
Mělo by omezit příjem mastných a smažených potravin denně před odběrem krve;
zdržujte se jídla, čaje a kávy po dobu 8-9 hodin, je dovoleno pít čistou vodu;
Nekuřte nejméně 3-4 hodiny.

V případě trvalého léčení (hormony, antikoagulancia, protizánětlivá léčiva, antibiotika, ředidla krve) byste o tom měli informovat asistenta laboratoře.

Při aplikaci sputa byste měli dobře čistit zuby a několikrát si vypláchnout ústa. Materiál odeberte ve sterilní nádobě. Pro dosažení lepších výsledků lze večer použít expektoranci nebo mukolytikum.

Diagnóza se skládá z několika fází.

Plotový materiál. Lze jej provádět v laboratoři i na dálku. Některé typy materiálu, které pacient sbírá nezávisle (moč, hlen).

Zničení struktury nukleových kyselin (denaturace molekul DNA a RNA). K tomu se testovaný materiál zahřívá na teplotu 98 ° C a udržuje se několik minut. Výsledkem je, že se dvojitá šroubovice uvolní, vytvoří se jednovláknové molekuly.

Žíhání Po přidání primeru (krátký úsek nukleové kyseliny) teplota klesne o několik stupňů, aktivuje se polymeráza.

Elogace. Teplota je nastavena na optimální úroveň, enzymová aktivita dosahuje maxima a druhý řetězec je dokončen v souladu s Chargaffovým pravidlem komplementarity.

Pro dokončení studie je nezbytné syntetizovat požadovaný počet molekul DNA - asi 50 cyklů výše uvedené reakce. To trvá asi 2-3 hodiny. Pozitivní výsledek reakce neznamená vždy aktivní stadium onemocnění, ale je indikátorem přítomnosti mikroorganismu v těle.

Výhody a nevýhody metody

Ve srovnání s jinými mikrobiologickými metodami, PCR nepotrvá dlouho, než detekuje Mycobacterium tuberculosis pomocí PCR, výsledek lze získat v den testování.

Další výhodou je vysoká specifičnost analýzy, která umožňuje detekci přítomnosti patogenu s přesností 90-95% v téměř každém biomateriálu (krev, moč, výkaly, mozkomíšní mok, sputum, návaly průdušek).

Existuje však několik nevýhod metody:

poměrně vysoké procento falešně pozitivních výsledků (až 15%), což je spojeno s detekcí neživých mikroorganismů;
v některých případech můžete tuto skutečnost vynechat, protože Mycobacterium tuberculosis je často vystavena mutacím a změnám genetického materiálu;
nízká účinnost při vyšetření osob s imunodeficiencí;
vysoké náklady na výzkum, potřeba drahých zařízení a činidel.

Co lze vyměnit?

Vzhledem k rozmanitosti forem infekce tuberkulózy je pro přesnější diagnózu a volbu léčby nutné kombinovat několik diagnostických studií:

Povinná analýza pro děti je Mantoux test. Pokud se zavedení tuberkulínu (genetický materiál mykobakterií) projeví výraznou reakcí, lze předpokládat infekci tuberkulózním bacilem.

Pro vizualizaci patologického fokusu lze použít rentgenové metody. V diagnostice extrapulmonální tuberkulózy se používají endoskopické metody při současné biopsii:

bronchoskopie pomáhá identifikovat léze hrtanu, průdušnice, průdušek;
kolonoskopie - střeva;
cystouretroskopie - orgány močového systému;
hysteroskopie - ženské genitálie. Tyto metody nejsou specifické, pro stanovení přesné diagnózy by měl být identifikován patogen.

Obecné klinické testy pomohou specifičtěji určit stav těla. Vyžaduje se kompletní krevní obraz s leukocytárním vzorcem.

Zvýšení počtu neutrofilů se sníženou hladinou lymfocytů a zvýšení rychlosti sedimentace erytrocytů (ESR) indikuje aktivní zánětlivý proces bakteriální etiologie. Vyloučit poškození orgánů močového systému pomocí obecné analýzy moči a kultury pro sterilitu.

PCR je v současné době dostupná ve většině soukromých laboratoří. To vyžaduje nejen vysoce kvalifikované odborníky, ale také drahé vybavení, velký počet činidel. Použití této metody je proto i přes vysokou přesnost a specifičnost omezené.

PCR diagnostika tuberkulózy

Tuberkulóza je specifická infekce, její zaměření může být v lidských tkáních po celá léta a pak se šíří několik měsíců. Jedná se o chronické onemocnění, jehož optimální léčebné režimy je obtížné vybrat. Jedním z důvodů je pozdní diagnostika, kdy se mykobakterie, zatímco v lidském těle, již přizpůsobily mnoha lékům.

Jaké moderní metody diagnózy existují? PCR diagnostika - co to je? Jaký je tento výzkum? V jakých případech je tuberkulóza diagnostikována touto metodou a jaká je její podstata?

Co je to PCR diagnostika

Je to jedna z nejmodernějších metod diagnostiky nejen nemocí, ale také detekce biologického materiálu. PCR diagnostika byla vynalezena relativně nedávno. Asi před 30 lety v roce 1983, americký biochemik, Carey Banks Mullis, navrhl komplexní schéma obnovy biologického materiálu mikroorganismů v jednom krátkém segmentu. Díky jeho objevu získal vědec nejvyšší cenu - Nobelovu cenu.

Co je to - PCR diagnostika infekcí? Polymerázová řetězová reakce (PCR) je diagnóza detekce virových onemocnění, založená na metodách genetického inženýrství. Je široce používán v lékařské mikrobiologii, imunologii a virologii. Metoda je univerzální a pomáhá diagnostikovat malé množství materiálu. Infekce může být detekována doslova v prvních hodinách infekce, dlouho předtím, než se objeví první příznaky onemocnění.

Metoda spočívá v tom, že z materiálu od nemocného není získán samotný patogen, nýbrž fragmenty genomu (částice DNA), jeho biosyntéza s následným určením, do které třídy mikroorganismů získaný genetický materiál patří, pomocí molekulárně genetických metod.

Navzdory skutečnosti, že se jedná o komplexní proces, trvá mnohem méně času než mnoho biologických metod detekce infekčních agens. Během několika hodin lze pomocí PCR detekovat mikroorganismus. K tomu není nutné izolovat ji od prostředí (krev, mozkomíšní mok, sputum) a pěstovat ji po dlouhou dobu na umělých živných médiích. Stačí, když je ve studovaném materiálu přítomen malý fragment řetězce DNA infekčního činidla.

Základem reakce je možnost za umělých podmínek (in vitro) vytvořit syntézu molekul nukleové kyseliny infekčního agens.

Co je potřeba pro PCR?

Primery jsou segmenty DNA, ze kterých začíná biosyntéza nebo tvorba.
Nukleotidy nebo komplexní sloučeniny, které jsou základem molekuly DNA nebo RNA.
Polymerázová řetězová reakce není možná bez přítomnosti polymerázy, což je enzym urychlující PCR.

Fáze diagnostiky PCR

Jak probíhá molekulární diagnostika pomocí PCR? Postup je jednoduchý a trvá krátkou dobu s ohledem na sběr materiálu.

Před zahájením studie si vezmou potřebný biologický materiál - to je voda z průdušek, krev, obsah žaludku, sputum. Typ biologického materiálu závisí na podezřelém patogenu.
Denaturace nebo zničení primární struktury DNA, která se skládá ze dvou řetězců. Podstatou této fáze je oddělení dvou řetězců pod vlivem vysoké teploty (maximum je 98 ° C, které trvá ne déle než dvě minuty).
V dalším stadiu PCR, zvaném annealing, se teplota sníží o několik stupňů, takže se primer naváže na DNA řetězec.
Prodloužení, během kterého probíhá syntéza požadovaných molekul přímo.

Výsledkem je, že pouze 25–30 takových cyklů obdrží potřebný počet kopií DNA mikroorganismu, které lze snadno rozpoznat.

Vyžaduje PCR diagnózu tuberkulózy?

Není možné, aby všichni lidé s podezřením na tuberkulózu prováděli PCR, protože tento způsob vyžaduje drahé vybavení. Ne všechny veřejné kliniky si to mohou dovolit koupit. Navíc se tak stalo, že obvyklé metody diagnostiky infekce ve většině případů se také ospravedlňují.

Patří mezi ně:

průzkum pacientů, historie;
úplné vyšetření osoby;
studie s použitím tuberkulinového testu Mantoux;
radiografie nebo fluorografie;
počítačová diagnostika v případě potřeby;
metody mikrobiologického výzkumu: mikroskopická analýza a bakteriologické vyšetření sputa.

PCR pro tuberkulózu se provádí ve zvláštních případech, kdy je obtížné stanovit diagnózu nebo není možné provádět jiné instrumentální metody.

I přes hojnost diagnostických metod stále roste výskyt tuberkulózy. V současné době nejde jen o jeho růst, ale i další funkce:

onemocnění se často vyskytuje v těžké formě;
počet smrtelných případů se zvyšuje;
stále odolnější vůči moderní chemoterapii jsou diagnostikovány formy onemocnění.

Neochota samotných lidí každoročně podstoupit rutinní lékařská vyšetření, odmítnutí očkování vede k šíření tuberkulózy. V takových podmínkách potřebujeme rychlé, informativní a účinné výzkumné metody, které by měly být přístupné dětem i dospělým. Všechny výše uvedené diagnostické metody jsou mnohem horší než PCR.

Výhody diagnostiky tuberkulózy pomocí PCR

Tento výzkum, i když nový, se osvědčil, zejména v kontroverzních případech, kdy není možné provést diagnózu z několika důvodů.

Díky PCR je mnohem snazší detekovat původce tuberkulózy v testovaném materiálu.

Výhody PCR diagnostiky jsou následující.

Jedná se o rychlou analýzu. Malý fragment molekuly DNA může být použit k diagnostice během pouhých několika hodin (asi pět), která se úspěšně používá v nouzových situacích, kdy například před operací je nutné určit, zda je člověk nemocný tuberkulózou.
PCR analýza je povolena v případě, kdy jsou jiné metody nedostupné nebo zakázané (pro detekci plicní tuberkulózy, někdy musíte vzít několik radiografických snímků, což bude velká dávka záření).
Pomocí PCR se vyšetřuje biologické prostředí na přítomnost patogenu. Například můžete provést studii mozkomíšního moku, pokud existuje podezření na tuberkulózní meningitidu.
Povolena PCR diagnostika infekčních onemocnění u dětí, protože metoda je bezpečná.
Umožňuje identifikovat patogen v jakékoli fázi onemocnění.
Vysoká citlivost PCR umožňuje detekci Mycobacterium tuberculosis, i když je v biologickém materiálu pouze několik mikroorganismů.
Je dobré provádět diagnózu recidivy onemocnění.

Přečtená PCR se zdá být téměř dokonalou diagnostickou metodou, která by měla mít podezření na tuberkulózu. Existují však i nevýhody, které je třeba vzít v úvahu.

Nevýhody PCR v diagnostice tuberkulózy

V naší době je taková diagnostika vzácnější než pravidelnost. A pro to je důvod.

Jedná se o nákladnou výzkumnou metodu. Na mnoha klinikách chybí vybavení pro PCR kvůli jeho vysokým nákladům, ale analýza může být stále prováděna v placených laboratořích.
Ihned po ošetření mohou být v lidském těle stále přítomny mrtvé mykobakterie nebo žijící v malých množstvích (výsledek bude pozitivní během diagnostiky PCR), takže metoda bude v této době nespolehlivá, nemá smysl ji provádět.
Výsledkem mutací mykobakterií je neúčinná PCR - nelze syntetizovat normální sekvenci řetězce DNA.
Je nutné zvolit správné prostředí pro studii, krev je odebírána pouze v případě, že je podezřelá z infekce (sepse), není třeba brát sputum, pokud existuje otázka tuberkulózy orgánů nervového systému. V tomto případě nebude PCR schopna detekovat patogen a diagnóza bude neinformativní.

Indikace pro detekci tuberkulózy pomocí PCR analýzy

PCR diagnostika tuberkulózy se provádí nejčastěji v kontroverzních případech. Kdy lékaři tuto studii doporučují?

Pokud je obtížné provést diagnózu obvyklými dostupnými metodami, byl kontakt s pacientem s tuberkulózou.
V případě, že osoba nemůže být doručena na kliniku, aby podstoupila rutinní rutinní testy na tuberkulózu, je snazší jej vyšetřit pomocí PCR, protože sputum pro test může být dodáno do nádoby a diagnóza je potvrzena během několika hodin.
Pokud má člověk nouzovou operaci a je naléhavé zjistit, zda je nemocný tuberkulózou.
Pokud je to nutné, těhotná žena je také lepší vyšetřit na tuberkulózu pomocí PCR, protože metoda je bezpečná.
Každý, kdo nebyl diagnostikován tuberkulózou, byl na základě placení potvrzen bakteriologickými metodami a fluoroskopií. To se děje, když je léze v plicích nepostřehnutelná v přímém obraze, a osoba, která během studie dodala sputum, nemohla dodržovat doporučení pro správný sběr materiálu. V tomto případě se člověk obává všech příznaků charakteristických pro plicní tuberkulózu.
Když existují pochybnosti o výsledcích testu Mantoux.
Je vhodnější provést PCR diagnostiku tuberkulózy u dětí. Tento postup je bezpečný, nevytváří další ozáření a je účinný při detekci obtížně diagnostikovatelných forem onemocnění.

Včasná diagnóza tuberkulózy je klíčem k řádně předepsané léčbě a snížení šíření nemoci. Často známé metody detekce onemocnění nejsou vždy účinné. Proto je dnes PCR jednou z nejspolehlivějších a nejbezpečnějších způsobů detekce infekce v raných fázích jejího vývoje.

PCR analýza pro diagnostiku tuberkulózy

Medicína nikdy nezůstane v klidu a pokrok ve zdravotnictví umožňuje diagnostikovat a léčit mnoho dříve nepostižených onemocnění. Existují také nemoci, které nelze zjistit vizuální kontrolou. Mezi nimi byla vždy tuberkulóza. Je to nebezpečné infekční onemocnění, které postihuje plíce, klouby a kosti a často vede k smrti i v našich dnech. Diagnostické metody pro toto onemocnění byly zlepšeny, což umožňuje detekci onemocnění v dřívějších stadiích, kdy je léčitelný. Mezi ně patří nejen rentgenové a Mantouxové testy, ale také PCR pro tuberkulózu.

Tuberkulóza - co to je

Dříve, tuberkulóza byla volána suchá nemoc nebo phisisis. Jedná se o bakteriální infekci, která nejčastěji postihuje plíce. Jeho extrapulmonální formy - tuberkulóza kostí a kloubů, tuberkulózní meningitida - jsou méně časté a pokročilejší stadia. Jako původce tohoto infekčního onemocnění se uvádějí mykobakterie. Tuberkulóza bacillus je také nazýván Koch hůlkou.

TBC infekce je velmi nakažlivá, přenáší se vzduchovými kapičkami při kašlání a kýchání pacienta. Jedinou ochranou proti tomuto onemocnění je včasná vakcína. Nechrání před infekcí, ale neumožňuje bacilům vstoupit do těla, aby způsobily tuberkulózu.

Formy tuberkulózy

K onemocnění může dojít jak v otevřené, tak v uzavřené formě. Rozdíly jsou následující:

uzavřená tuberkulóza je asymptomatická. Za těchto okolností není Kochova hůlka ve sputu detekovatelná, proto není nakažený pro životní prostředí nebezpečný. Takový průběh nemoci obvykle neohrožuje nejinfikovanější, ale existují výjimky - v jednom případě deseti je uzavřená tuberkulóza schopna jít do otevřené formy;
s otevřenou formou se mykobakterie, které způsobují tuberkulózu, nacházejí ve slinách a sputu pacienta. Infikovaný organismus představuje velké nebezpečí pro společnost i v izolaci. Zpravidla onemocnění postihuje plíce. Pokud není diagnostikována dříve, může mít jiné formy, jako je tuberkulóza kostí nebo kloubů.

Otevřená forma tuberkulózy je diagnostikována různými způsoby. Pacient podstoupí rentgen hrudníku nebo rentgen hrudníku, analýzy jeho biologického materiálu nebo kožního testu Mantoux. V poslední době se objevila další metoda, která je považována za stejně účinnou - analýzu polymerázové řetězové reakce (PCR).

Co znamená PCR

V lékařské praxi jsou již dlouho používány metody diagnostiky tohoto nebo tohoto onemocnění detekcí jeho DNA nebo RNA v lidském těle. To je přesně PCR pro tuberkulózu. Jedná se o vysoce přesnou analýzu krve nebo jiné biologické tekutiny, která vám umožní identifikovat bakterie s minimem jejich koncentrace ve vybraném materiálu, stačí jedna buňka. Studie se provádí za použití speciálního polymerázového enzymu.

Výhody metody

PCR je diagnostická metoda, která se ukázala na nejlepší straně, takže se používá poměrně často, a to jak v kombinaci s jinými metodami, tak nezávisle. Jeho výhody:

nejkratší výrobní období. Studie se provádí rychle, asi za 5 hodin pomocí PCR může detekovat přítomnost bacil tuberkulózy v biologické tekutině pacienta. To platí zejména v případě, že potřebujete provést okamžitý chirurgický zákrok a předtím, než dostanete přesnou diagnózu;
Stává se, že jiné diagnostické metody jsou pro pacienta kontraindikovány. Například, rentgenové paprsky mohou být dělány ne každý. Kromě toho, obraz není vždy možné provést diagnózu, zejména v případě, že nemoc je v rané fázi. Pomocí metody PCR je patogen okamžitě detekován;
Pro analýzu je vhodná biologická tekutina pacienta. PCR urine a slin pro tuberkulózu se provádí k identifikaci plicních a extrapulmonálních forem. Studie se také provádí za použití pacientovy míchy k detekci tuberkulózní meningitidy.
Metoda je naprosto bezpečná. Chcete-li to provést, stačí od pacienta získat biologickou tekutinu. PCR diagnostika tuberkulózy u dětí je pohodlná a neškodná, protože rentgenové vyšetření je povoleno pouze ve věku 18 let a Mantouxův test někdy způsobuje nežádoucí účinky;
PCR je vysoce citlivá analýza. To vám umožní identifikovat Koch tyčinky s minimální koncentrací mykobakterií;
S pomocí speciálního polymerázového enzymu je onemocnění diagnostikováno v jakémkoliv stadiu, od raného do pokročilého;
tento způsob je účinný při diagnostice recidivy onemocnění;
Tato metoda je průlom v přesných diagnózách v raných stadiích onemocnění. To vám umožní zahájit léčbu v nejkratším možném čase a zničit patogeny, pokud ještě neměly nevratný negativní vliv na orgány a systémy lidského těla.

Kde provést PCR analýzu tuberkulózy

Ačkoliv je PCR analýza tuberkulózy vysoce účinnou metodou pro diagnostiku tohoto onemocnění, používá se jen zřídka samostatně. Jedná se zpravidla o další metodu detekce tuberkulózy, která se používá vzácně. Faktem je, že tato metoda je poměrně drahá.

Veřejné kliniky nemají možnost nakupovat speciální vybavení pro provádění analýzy PCR a vláda nevidí smysl financování tohoto článku, protože tuberkulóza může být diagnostikována jinými způsoby. Taková studie se nejčastěji provádí na soukromých klinikách, které si mohou dovolit zakoupit potřebné vybavení.

Nevýhody metody

Vysoká cena není jedinou nevýhodou PCR. Kromě vysokých nákladů má metoda další nevýhody a nedostatky, například:

PCR pro tuberkulózu dává pozitivní výsledek i po ošetření, protože bere mrtvé buňky jako živé bakterie, proto tato metoda není vhodná jako kontrolní vyšetření pacienta k potvrzení jeho uzdravení;
mutace tuberkulózy bacilli a jejich DNA je modifikována, což může ovlivnit spolehlivost výsledku;
PCR krevní testy na tuberkulózu se provádějí zřídka, protože přítomnost Kochových tyčinek v těchto biologických tekutinách je velmi obtížné detekovat. To je možné pouze v posledním stadiu nebo v sepse. Obvykle je pacientova sputa odebírána pro diagnózu;

Stojí za zmínku, že nejpřesnějším výsledkem je právě sběr obsahu žaludku pacienta. Pokud je podezření na plicní tuberkulózu, kultura sputa bude nejúčinnějším způsobem diagnostiky onemocnění. Pokud má pacient extrapulmonální formu, pak v tomto bioenvironmentu nemusí být žádné bakterie. Pro stanovení tuberkulózy kostí, kloubů atd. Pomocí PCR je potřebná další biologická tekutina, například mícha.

Jak je PCR pro tuberkulózu

Jak bylo popsáno výše, podstatou PCR analýzy je detekce DNA patogenu v biologické tekutině pacienta polymerázovou reakcí. Hlavní fáze metody:

Odběr biologických materiálů. PCR není jen hemotest - studovaná biomasa může být sliny, moč, cerebrospinální tekutina, bronchiální mycí tekutina, obsah žaludku, sputum.
Poté je biomasa vystavena vysokým teplotám, aby se zničila struktura DNA patogenu.
Pak se teplota postupně snižuje a na zničený prvek DNA je navázán primer.
Podle výsledků molekulární syntézy, která trvá přibližně 30 cyklů, je detekován kmen určitých patogenních bakterií nebo jeho nepřítomnost.

Tato analýza vyžaduje dobré financování, takže PCR není prováděna velmi často. Tato metoda však není stejná, pokud jsou jiné diagnostické možnosti zakázány, nebo v případě nouze, kdy není čas čekat na výsledek.

Shrnutí

Na závěr můžeme vyvodit následující závěry:

PCR je vysoce přesná analýza, která dokáže detekovat tuberkulózu několik dní po infekci;
tato analýza je prováděna za 3,5 - 5 hodin, takže v případě, že návrh zákona jde do hodin, je nenahraditelný;
je to bezpečná metoda, která nemá žádné vedlejší účinky;
Používá se v případech, kdy jiné diagnostické metody vykazují nekonzistentní výsledky nebo je jejich použití kontraindikováno.

Nicméně, PCR je zřídka hotová, protože to je drahá analýza, která vyžaduje instalaci speciálního vybavení. Navíc není vždy informativní, takže odborníci používají tuto metodu detekce tuberkulózy jako další.

Existují kontraindikace testu Mantoux? Provede se PCR analýza tuberkulózy.

Tuberkulóza je nebezpečné onemocnění, které lze úspěšně léčit včasnou diagnózou.

Jedna z nejvíce informativních studií k identifikaci onemocnění v rané fázi se nazývá metoda PCR (polymerázová řetězová reakce).

PCR analýza není pouze nejinformativnější, ale také jednou z nejpřístupnějších studií, které mohou detekovat tuberkulózu v jejích raných stadiích.

Co je to PCR analýza?

Všechny živé mikroorganismy, včetně virů a bakterií, obsahují ve své struktuře molekuly RNA a DNA. Zvýrazněním těchto kyselin je možno s velkou jistotou říci, které cizí látky jsou přítomny v lidské krvi a které umožňují přesnou diagnózu.

Podstatou metody PCR je speciální zpracování vzorků biologických tekutin, v důsledku čehož lze určit, ke kterým druhům mikroorganismů v nich patří.

Analýza PCR pro tuberkulózu: indikace, výhody a nevýhody

PCR technika se používá u lidí s těžkými plicními lézemi v těchto případech a respiračních projevech (těžký kašel, hemoptýza), kdy je nemožné přesně diagnostikovat nemoc klinickými symptomy.

Doporučuje se podstoupit studii a po přímém kontaktu s nositelem onemocnění. Mezi jeho výhody patří:

rychlost provedení - pro dosažení výsledku nemusíte pěstovat kulturu patogenu ani provádět jiné složité postupy;
vysoce informativní - při diagnostice tuberkulózy dosahuje přesnost analýzy 90% a vyšší;
vysoká citlivost a specificita - pro identifikaci patogenů v materiálu může obsahovat pouze jednu buňku viru;
univerzálnost - pro analýzu jsou vhodné prakticky všechny biologické tekutiny: sputum, krev, průduškové lávy.

Pro srovnání: přesnost mikroskopie nátěrů sputa, která se používá k detekci tuberkulózy, je pouze 40-50% a při nízkém počtu patogenů je snížena na 10% nebo méně. Kultura sputa je informativnější, ale dosažení výsledků trvá 2 až 8 týdnů.

PCR můžete použít pro tuberkulózu místo Mantouxu, pokud má osoba nějaké kontraindikace na vzorku.

Nevýhody této techniky zahrnují riziko falešně negativního výsledku. Jinými slovy, absence specifické DNA ve sputu, krvi nebo moči ještě nenaznačuje absenci tuberkulózy u pacienta.

Je to důležité. V diagnostice tuberkulózy u dětí je citlivost PCR analýzy nižší než u dospělých a je přibližně 25-83%.

Foto 1. Dělat PCR místo Mantoux k dítěti je dobrá volba, pokud je alergický nebo často nemocný.

Postup analýzy PCR

Postup pro provádění PCR analýzy se provádí pomocí speciálního zařízení zvaného zesilovač a sestává ze čtyř stupňů. Studie vyžaduje řezy DNA, které začínají syntézu molekul, nukleotidů (bází molekul DNA), stejně jako polymerázy nebo enzymu, který postup urychluje.

Sběr biologického materiálu (sputum, krev, výplach průdušek).
Zahřátí vzorku na teplotu asi 98%, aby se zničila primární struktura řetězce DNA.
Žíhání nebo snížení teploty o několik stupňů pro navázání primeru na řetězec DNA.
Syntéza molekul potřebných k dosažení výsledku.

Po provedení 25-30 takových cyklů se vytvoří určitý počet kopií DNA virů, pomocí nichž lze snadno určit původce onemocnění.

Pozor: PCR analýza nerozlišuje mezi „mrtvými“ mikroorganismy a „živými“, proto může být výsledek po určité době po léčbě pozitivní.

Příprava na analýzu

Pokud se provádí PCR krevní test na tuberkulózu, pak není nutné speciální školení, ale pacientům se doporučuje dodržovat obecná pravidla: zdržet se jídla nejméně 8 hodin, eliminovat alkohol a užívat léky, nekuřte hodinu před odebráním materiálu.

Sputum se shromažďuje ráno po kartáčování a důkladném opláchnutí úst.

Pokud je exsudát špatně vylučován, měli byste vykašlávání užít večer nebo inhalovat. Sputum s hlenem, hnisem, bílými nebo nažloutlými skvrnami má diagnostickou hodnotu.

Pokud není možné pro analýzu použít sputum, používají se k identifikaci patogenů bronchiové tampony. Taková analýza nevyžaduje přípravu a materiál se odebere následujícím způsobem. S pomocí laryngeální stříkačky se pacient nalije do průdušnice a pro výzkum se používá roztok chloridu sodného, který způsobuje silný kašel - kapalina pro kašel.

Pozor. Výsledek analýzy naruší antibiotika, heparin a další léky používané pro lokální léčbu, proto se studie doporučuje 10-14 dnů po podání.

Metody testování krve na tuberkulózu PCR

Příčinným činitelem tuberkulózy je mykobakterie nazývaná bacil tuberkulózy nebo Kochův bacil. Jednou v lidském těle se nemusí dlouho projevovat. Ale postupem času, jakmile se objeví příznivé podmínky, může bakterie způsobit plicní tuberkulózu nebo jiné orgány.

Aby bylo možné úspěšně bojovat s touto nemocí, je velmi důležité ji diagnostikovat v raných fázích. Krevní test na tuberkulózu pomocí PCR je nejúčinnějším a nejrychlejším způsobem diagnostiky tuberkulózy. To trvá čtyři hodiny. Je pohodlnější než jiné metody, má méně kontraindikací a téměř 100% přesnost.

Co je PCR krevní test?

Dnes je PCR analýza jednou z nejnovějších metod pro diagnostiku různých onemocnění těla. Pro detekci tuberkulózy je tato metoda nejúčinnější ve srovnání s jinými dosud používanými metodami. Metoda byla objevena v roce 1983 slavným chemikem K. Mulllisem, který za něj získal Nobelovu cenu o deset let později.

Základem této metody je polymerázová řetězová reakce, která umožňuje zjistit nejen přítomnost patogenu v krvi, ale také jeho vzhled. Za tímto účelem se pomocí metody PCR detekuje část DNA patogenu a provede se její identifikace. I když je v krvi několik různých patogenů, tato technika vám umožní všechny tyto patogeny detekovat.

Krevní test PCR pro tuberkulózu je předepsán pacientovi, pokud existuje podezření na bacil tuberkulózy, ale není detekován jinými metodami.

Pokud je to žádoucí, každý může tuto analýzu předat sám, kontaktovat kliniku, kde se provádí, například INVITRO. Je to jedna z největších soukromých společností s lékařskými laboratořemi v mnoha zemích.

Je tato metoda účinná při diagnostice tuberkulózy?

V současné době neexistuje přesnější analýza k identifikaci Kochových tyčinek v těle pacienta. Kompletní krevní obraz je účinný, ale umožňuje získat pozitivní nebo negativní výsledek pouze po dostatečně dlouhé době. Za tímto účelem se materiál, který je předmětem studie, vyseje na živné médium a teprve po několika týdnech je jasné, zda se bakterie množí.

Metoda PCR umožňuje detekci DNA bakterií během několika hodin, což je velké plus pro diagnostiku. Analýza navíc umožňuje přesně identifikovat bakterii, i když je v krvi velmi malá.

Kontraindikace metody

Tato výzkumná metoda nemá téměř žádné kontraindikace. Vzhledem ke skutečnosti, že krev je používána, není na pacientově stavu. Přítomnost nachlazení neovlivňuje výsledek analýzy.

Nedoporučuje se provádět po očkování, ani po nedávné léčbě. To je způsobeno tím, že tělo ještě není očištěno a zbytky bakterií mohou ovlivnit výsledek.

Výhody analýzy

Krevní test PCR pro tuberkulózu má několik výhod oproti jiným metodám vyšetřování, jako je Mantoux test nebo rentgen. Mezi ně patří následující vlastnosti:

Rychlost provedení. Ve srovnání s jinými PCR analýzami provedenými během několika hodin.
Pro tento postup můžete použít nejen krev, ale i další biologické sekrece těla.
Procedura nemá žádné kontraindikace, může být provedena nejen pro dospělé, ale i pro děti. Vhodné i pro těhotné ženy bez poškození zdraví.
Metoda umožňuje detekci infekce krve bakteriemi v prvních fázích, kdy nejsou žádné vnější známky onemocnění.
Tato technika umožňuje identifikovat patogen s nejmenším množstvím bakterií v materiálu.
Dává dobrý účinek ve studii pacienta, znovu infikovaný.
Analýzu lze provést bez ohledu na to, jak se pacient cítí. Například reakce Mantouxu se provádí, pokud pacient nemá nachlazení a horečku. V tomto případě taková omezení neexistují.

Jak je vidět z uvedeného seznamu, tato diagnostická metoda je mnohem výhodnější než jiné. Je zcela neškodný pro alergické pacienty. Může být úspěšně používán dospělými i dětmi. Tato technika vám umožní ušetřit čas při diagnostice a rychleji zahájit léčbu.

Metoda je také vhodná pro lidi z provincie, kde nejsou žádné relevantní laboratoře. Nemusí přijít několikrát na kliniku, jeden den stačí na to, aby se výsledek vyšetření a předpis léčby dostal od lékaře.

PCR krevní test Nevýhody

Kromě výhod má tato metoda řadu nevýhod, které mohou být překážkou pro provádění analýzy PCR:

Relativně vysoké náklady na postup. Provádění takové analýzy vyžaduje drahé vybavení a ne každá klinika si to může dovolit. Je ve velkých laboratořích soukromých společností. Ceny tam jsou zpravidla vždy vysoké.
Analýza dává správný výsledek pouze v případě, že materiál pro studii je správně vybrán. Například u tuberkulózy genitourinárního systému krevní test neprokáže přítomnost onemocnění. V tomto případě je třeba odebrat moč nebo výtok z močových orgánů.
Metoda ne vždy dává přesné výsledky u dětí. To je způsobeno vlivem očkování. Například po očkování BCG se tato analýza nedoporučuje.
Existuje možnost získat falešně pozitivní nebo falešně negativní výsledek. Co to je? Metoda má velmi vysokou citlivost. Při sběru materiálu je třeba respektovat zvýšenou sterilitu. Pokud materiál dostane nejmenší počet cizích bakterií, analýza bude poškozena, výsledek bude zkreslený.

Navzdory nedostatkům je metoda široce používána. Například v případech, kdy je nutné urgentně určit nemoc u pacienta. To může být předepsáno pro těhotné ženy, pokud mají podezření na infekci, která by mohla ohrozit dítě nebo matku. Někdy předepsáno pro děti před nástupem do mateřské školy. Ale to je na žádost rodičů.

Příprava postupu

Před provedením analýzy musí pacient provést přípravné činnosti. Závisí na tom, jaký materiál se vzdá:

Pokud je nutné darovat krev, měla by být připravena sterilní zkumavka. Antikoagulant se k němu přidává - speciální roztok, který zabraňuje srážení krve. Shromážděný materiál se vloží a jemně se promíchá. Krev se odebírá jednorázovou injekční stříkačkou ze žíly.
Procedura se provádí ráno na lačný žaludek. Krev se uchovává v chladničce déle než pět hodin. Pokud toto pravidlo ignorujete, výsledky analýzy mohou být nepřesné.
Týden před dodáním biomateriálu přestat užívat jakékoli léky.
Po užití alkoholických nápojů nemůžete darovat krev.
V přítomnosti chronických infekčních nebo zánětlivých onemocnění je postup odložen, dokud se osoba plně neobnoví.

Během procedury je nutné dodržet maximální sterilitu. Proto je důležité absolvovat testy pouze na ověřených klinikách pod vedením zkušeného odborníka. Je třeba mít na paměti, že minimální vniknutí cizích mikroorganismů může způsobit nesprávný výsledek. Aby se tomu zabránilo, může lékař nařídit přezkoumání.

Jak se odebírá krev pomocí PCR?

K darování krve k analýze nesmí pacient jíst více než šest hodin. Nejlepší je podstoupit proceduru ráno na lačný žaludek. Krev se odebírá z krychlové žíly jednorázovou jehlou ihned do sterilní zkumavky. Antikoagulant se tam vstřikuje tak, aby se krev nesrážela. Promíchejte obsah zkumavky opatrně, vyhněte se náhlým pohybům.

Pokud byla krev odebrána mimo laboratoř, měla by být okamžitě doručena technikovi. Pro testování na tuberkulózu by měla být skladována nejvýše pět hodin. Po uplynutí této doby může být výsledek nepřesný. Odběr materiálu mimo laboratoř je povolen pouze v případě, že pacient nemůže ze zdravotních důvodů dorazit do nemocnice. Například si lehne a není možné najmout vhodnou dopravu.

Výsledky dekódování

Výsledek PCR může být buď pozitivní, nebo negativní. Pozitivní znamená přítomnost bakterií v těle. Negativní označuje, že chybí. Ačkoli ne vždy pozitivní výsledek hovoří o tuberkulóze. Může to být chybné, takže k potvrzení diagnózy jsou nutné další diagnostické testy.

Všechny ostatní informace jsou pro vnímání pacienta obtížné a jsou zapojeny do specializace. V případě pozitivního výsledku lékař předepíše nezbytnou léčbu.

Náklady na zkoušky v různých střediscích

Cena procedury se může lišit v závislosti na zdravotním středisku, kde se provádí. Podrobnosti naleznete v tabulce níže.

PCR analýza tuberkulózy

PCR analýza tuberkulózy je nejoblíbenější mezi lékařským výzkumem v této oblasti.

Ale jak varovat sebe a své blízké z této hrozné nemoci? Jak složit potřebné testy pro PCR?

Příznaky tuberkulózy a její prevence

Odborníci říkají, že asi 30% z celkové populace trpí tuberkulózou.

Nejvyšší procento této choroby se vyvíjí v nerozvinutých zemích. K tomu nejčastěji dochází v důsledku snížené imunity u lidí.

Nemoc je jednou z nejstarších. Tato choroba se nachází ve sliznici mozku, v zažívacím traktu, na kloubech a páteři, v močovém systému av malých oblastech na lidské kůži.

Odborníci nejsnadněji určují postiženou kůži. Na místě jsou malé plomby, které se časem zvětšují, vybuchují bělavou kapalinou.

Kauzální původce tuberkulózy může být nejčastěji zachycen, když mluví s nemocnou osobou, když kašle nebo kýchá. Obvykle onemocnění postupuje bez symptomů nebo má otevřenou formu, ale PCR diagnostika tuberkulózy umožňuje jeho detekci v raných stadiích i v nouzových případech.

Symptomy onemocnění: prodloužený mokrý kašel, horečka, zimnice, nadměrné pocení v noci, prudká ztráta hmotnosti, pocit únavy a slabosti.

Otevřená forma onemocnění je nejnebezpečnější. Člověk trpící tuberkulózou je schopen infikovat zdravé lidi.

Nejdůležitějším příznakem plicního onemocnění je hemoptýza. Vyskytuje se v jakékoliv formě onemocnění.

V některých situacích to může vést k krvácení z plic osoby. Je to velmi nebezpečné a vyžaduje urgentní lékařský zásah.

Pro prevenci a rozpoznávání tuberkulózy odborníci předepisují: vzorek - tuberkulinový test, vyšetření biologického materiálu, fluorografii, rentgenové snímky a krevní test, sputum nebo sliny.

Diagnóza onemocnění

Zlepšení diagnostiky onemocnění - to je správné a během léčby. Ve většině případů obvyklé metody detekce patogenů nemají vždy účinek a jsou již zastaralé.

Nejdůležitějším způsobem, jak identifikovat a diagnostikovat plicní onemocnění, jsou lékařské vyšetření. Obvykle používejte PCR diagnostiku. Tento průzkum byl nedávno objeven v roce 1983 americkým biochemikem Mullisem.

Test u pacienta s plicní tuberkulózou se provádí výhradně ve zvláštních případech, kdy je obtížné stanovit diagnózu nebo je nemožné detekovat onemocnění instrumentálním způsobem.

Polymerázová řetězová reakce je spolehlivá metoda PCR. Tato analýza umožňuje určit původce toho, kolik je v krvi, moči a tekutinách míchy. Taková lékařská prohlídka je nejbezpečnější.

PCR analýza dává 100% výsledek.

Má vysokou citlivost, která pomáhá rozpoznat onemocnění poprvé po infekci, než se objeví příznaky onemocnění. Tato metoda analýzy poskytuje výsledek během několika hodin po dodání biologického materiálu. Výsev této analýzy se provádí třikrát, ale odsávání nemocného žaludku se provádí pouze v nemocnici.

Pro stanovení výsledků byla vyvinuta tři kritéria: vysoká přesnost, citlivost až 90%, specificita.

V některých případech se používá test na PCR:

diagnostikovat plicní tuberkulózu;
určit zdroj choroby;
definice extrapulmonální lokalizace;
diagnóza opakování.

Vyhodnotit výsledek a předepsat správné lékařské ošetření, může pouze odborník. Je velmi důležité přiřadit správné schéma léčby pro detekci tuberkulózy, je nezbytné provést test citlivosti patogenu na zařízení proti tuberkulóze.

Různé lékařské testy tuberkulózy

Potřebnou analýzu můžete provést dvěma způsoby: odebrat krev člověku nebo slině nebo vzít sputum.

Krevní testy PCR mohou být dvou typů: ELISA a PCR. Taková studie pomáhá monitorovat účinnost léčby.

ELISA pomáhá najít protilátky v lidském těle, které odolávají mikrobům tuberkulózy. Tato studie se provádí jednou denně. Hlavní nevýhodou je nízká citlivost, která umožňuje stanovit pouze onemocnění s nízkou úrovní infekce.

Nejoblíbenějším a nejúčinnějším výzkumem je analýza mycobacterium tuberculosis. S ní mohou lékaři snadno najít DNA bakterií v lidské krvi. Tato metoda se také používá k určení počtu bakterií, ke kontrole léčby pacienta, k detekci časné recidivy.

PCR slin je jednou z nejmodernějších výzkumných metod. Taková analýza pomůže identifikovat infekční bakterie ve slinách. Použitím PCR se zvyšuje počet fragmentů DNA škodlivých mikrobů.

Metoda kultivace je určena pro vyšetření lidského sputa pro detekci mikrobakterií.

Příprava na PCR testování

Pozor, pro PCR potřebujete správnou přípravu slin. Pokud nebudou dodrženy všechny předpisy, může být analýza falešně pozitivní.

Před zahájením zkoušky je zakázáno kouřit, užívat jídlo a léky, stejně jako konzumovat alkohol po dobu 12 hodin. Je zakázáno čistit si zuby, nemůžete používat oplachovací prostředek, osvěžovač úst a dentální nit.

Je zakázáno používat rtěnku a vstupovat do intimních vztahů. Dovoleno opláchnout ústa hladkou převařenou vodou;

Toto vyšetření pomůže určit: herpes, chlamydia, tuberkulózu, patogeny pneumonie, onkoviry, barolleózu, mononukleózu, HIV, hepatitidu všeho druhu, zarděnku.

Analýza mykobakterií se provádí převážně v kontroverzních případech, zejména pokud je obtížné stanovit diagnózu nebo před zahájením operace došlo ke kontaktu s pacientem s tuberkulózou, aby se zjistila choroba. Používá se k vyšetření těhotné ženy, protože tato metoda je pro matku a plod nejbezpečnější.

Někdy se analýza provádí na soukromé klinice, protože pacient nedodržoval pravidla pro testování, ale zároveň se obává všech symptomů. Analýzu lze provést, když odborníci po provedení testu Mantoux neví, nebo je-li dítě dítě.

Výhody a nevýhody lékařských testů pro stanovení tuberkulózy

PCR je nejoblíbenější a nejúčinnější způsob, jak zjistit nemoc.

Jeho největší rozdíl od jiných studií je rychlý a přesný výsledek.

Výhodou tohoto lékařského vyšetření je, že může být prováděna pro urologické, gynekologické, onkologické, infekční, hematologické, plicní, gastroenterologické a další studie.

Hlavní výhodou takové lékařské studie je, že krevní testy, sputum a sliny jsou připraveny v krátkém čase (detekce onemocnění trvá 5 hodin). Takové lékařské vyšetření umožňuje provádět testy, pokud jsou některé metody studia nemoci zakázány nebo nepřístupné. Skvělé pro detekci recidivy u lidí.

Díky této analýze bylo možné provádět výzkum pro jakékoliv biologické prostředí. Je povoleno odebírat materiál od dětí. PCR umožňuje identifikovat původce v jakémkoliv stadiu onemocnění. Vzhledem ke své vysoké citlivosti lze nalézt mikroby i v případě, že je přítomno jen několik bakterií.

Metoda PCR rozšiřuje své možnosti. Používá se také k určení otcovství, k výrobě nových genů, mutací, křížení prvků DNA a podobně.

Nevýhody této studie jsou drahá metoda průzkumu.

Po lékařském ošetření může krevní test prokázat přítomnost živých nebo mrtvých patogenů v malých množstvích, po lékařském vyšetření poskytne pozitivní výsledek.

Bakterie a mikroby mohou podstoupit mutaci, po které PCR nebude schopna je identifikovat a identifikovat, proto pouze odborník může předepsat studium požadovaného prostředí, jinak bude takové vyšetření neúčinné.

Po testování je negativní výsledek, ale to nevylučuje možnost infikování osoby tuberkulózou. Takové lékařské vyšetření se provádí u pacientů se závažným plicním onemocněním, kdy jiné studie neposkytují přesné výsledky. PCR bude užitečná pro osoby s plicní a extrapulmonální tuberkulózou.

Bohužel zdravotnické prostředky pro detekci patogenů tuberkulózy jsou velmi drahé.

Veřejné nemocnice a kliniky si to nemohou dovolit, ale placené kliniky provádějí pacientské testy a v krátké době poskytují hotové výsledky.